Ⅰ型胶原蛋白海绵的辐照交联及其组织相容性评价

发布时间：2017-07-30 04:04

  本文关键词：Ⅰ型胶原蛋白海绵的辐照交联及其组织相容性评价

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【摘要】：目前,在临床方面的广泛应用显示了Ⅰ型胶原蛋白海绵的重要性,各类严重的烧、烫伤给人们的日常生活带来了极大的影响。然而在进行手术修复的过程后,由于真皮组织移植手术方面的限制以及其对人们术后正常生活的影响,发展Ⅰ型胶原蛋白人工真皮的必要性就有了很大的意义。本文中所涉及到使用辐照交联法制备Ⅰ型胶原蛋白海绵,摒弃了常规利用小分子交联剂的化学法带来的生物安全性以及水资源浪费的问题,探究了利用高效清洁的辐照交联方法对材料后期微观结构的改变,并通过动物实验,对比临床应用的样品,探讨Co-60辐照交联制备Ⅰ型胶原蛋白海绵的组织相容性。1.利用酶解法,对市售新鲜的牛跟腱进行Ⅰ型胶原蛋白的提取,研究胃蛋白酶用量、底物浓度等对提取效率的影响,在控制提取温度、溶液的pH等条件下,得到最佳的提取条件,并对所提取的原料进行分子量、红外光谱、紫外吸收光谱等检测,以证明其为Ⅰ型胶原蛋白。2.利用辐照交联的方法制备Ⅰ型胶原蛋白海绵,通过控制Ⅰ型胶原蛋白固含量以及辐照的剂量与剂量率,得到辐照处理过后的Ⅰ型胶原蛋白凝胶,再进行冷冻干燥处理,最终得到Ⅰ型胶原蛋白海绵,并进行材料的孔径分布以及热稳定性等检测,确定适合用于临床实际应用的Ⅰ型胶原蛋白海绵及其制备工艺。3.通过进行动物实验(新西兰兔体内植入Ⅰ型胶原蛋白海绵,评价Ⅰ型胶原蛋白海绵的组织相容性),通过HE染色、Masson染色、墨汁灌注等实验判定材料的组织相容性良好,Evans Blue灌注实验证明了材料可以被血管化,之间关系相互印证,相互支持,对材料的组织生物相容性进行了很好的判定,验证了辐照交联的材料可以在体内进行降解。
【关键词】：Ⅰ型胶原蛋白海绵 人工真皮 辐照交联 组织相容性评价
【学位授予单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-14
• 第一章 绪论14-26
• 1.1 研究意义与背景14-15
• 1.2 胶原蛋白基本信息简介15-16
• 1.3 胶原蛋白的应用16-19
• 1.3.1 胶原蛋白在化妆品行业的应用17
• 1.3.2 胶原蛋白在食品中的应用17-18
• 1.3.3 胶原蛋白在生物医用材料领域的应用18-19
• 1.4 胶原蛋白的提取方法19-21
• 1.4.1 利用酸法进行胶原蛋白的提取20
• 1.4.2 利用碱法进行胶原蛋白的提取20
• 1.4.3 利用酶法进行胶原蛋白的提取20-21
• 1.5 胶原蛋白海绵的制备工艺21-22
• 1.5.1 Ⅰ型胶原蛋白海绵生产现状21
• 1.5.2 Ⅰ型胶原蛋白海绵交联方式探索方面进展21-22
• 1.5.2.1 利用EDC-NHS方法进行Ⅰ型胶原蛋白海绵交联21-22
• 1.5.2.2 利用Genipin作为交联剂制备Ⅰ型胶原蛋白海绵22
• 1.6 发展Ⅰ型胶原蛋白海绵的必要性22
• 1.7 本论文所取得的成果22-26
• 第二章 Ⅰ型胶原蛋白的提取与表征26-40
• 2.1 引言26
• 2.2 实验材料26-28
• 2.2.1 原材料的准备与处理26-27
• 2.2.2 实验仪器与试剂27-28
• 2.3 Ⅰ型胶原蛋白的提取28-33
• 2.3.1 牛跟腱处理方式对原材料利用效率的影响28-30
• 2.3.2 底物浓度对胶原蛋白提取量的影响30-32
• 2.3.3 胃蛋白酶用量对胶原蛋白提取的影响32-33
• 2.4 1型胶原蛋白的表征与分析33-37
• 2.4.1 利用SDS-Page电泳测定胶原蛋白分子量34
• 2.4.2 紫外吸收光谱法确定胶原蛋白34
• 2.4.3 FT-IR红外谱图确定胶原蛋白分子三螺旋结构34-35
• 2.4.4 Ⅰ型胶原蛋白原料的热变性温度35-36
• 2.4.5 Ⅰ型胶原蛋白原料的微观结构观察(SEM)36-37
• 2.5 小结37-40
• 第三章 辐照法制备Ⅰ型胶原蛋白海绵及其表征40-66
• 3.1 引言40-41
• 3.1.1 Ⅰ型胶原蛋白原料处理40-41
• 3.1.2 实验仪器与器材41
• 3.2 不同固含量原料进行辐照交联法制备Ⅰ型胶原蛋白凝胶41-56
• 3.2.1 0.5%固含量原料的辐照交联43-48
• 3.2.2 1%固含量原料对辐照交联的影响48-54
• 3.2.3 2%固含量原料的辐照交联54-56
• 3.3 Ⅰ型胶原蛋白海绵的制备与表征56-63
• 3.3.1 Ⅰ型胶原蛋白海绵的制备56-57
• 3.3.2 Ⅰ型胶原蛋白海绵的微观结构57-61
• 3.3.2.1 冷冻干燥法制备Ⅰ型胶原蛋白海绵57-59
• 3.3.2.2 辐照法制备Ⅰ型胶原蛋白海绵59-61
• 3.3.3 Ⅰ型胶原蛋白海绵的灰分含量测定61
• 3.3.4 Ⅰ型胶原蛋白海绵热稳定性的检测61-62
• 3.3.5 Ⅰ型胶原蛋白海绵细胞毒性测试62-63
• 3.3.6 Ⅰ型胶原蛋白海绵耐体外酶降解测试63
• 3.4 小结63-66
• 第四章 Ⅰ型胶原蛋白海绵组织相容性评价66-82
• 4.1 引言66
• 4.2 Ⅰ型胶原蛋白海绵组织相容性实验66-79
• 4.2.1 实验样品与器材66
• 4.2.2 实验样品的处理方法66-68
• 4.2.3 组织生物相容性实验分析68-79
• 4.2.3.1 Ⅰ型胶原蛋白海绵材料体内降解68
• 4.2.3.2 H&E染色结果68-72
• 4.2.3.3 Masson染色结果72-75
• 4.2.3.4 Evens Blue灌注实验75-78
• 4.2.3.5 墨汁灌注染色78-79
• 4.3 小结79-82
• 第五章 结论与展望82-84
• 参考文献84-88
• 致谢88-90
• 导师简介90-92
• 作者简介92-93
• 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书93-94

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本文编号：592390