PIM1表达对人骨肉瘤细胞增殖的影响

发布时间：2017-03-24 11:12

  本文关键词：PIM1表达对人骨肉瘤细胞增殖的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤,好发于长骨干骺端,其特点为青少年发病率高,恶性程度高,早期易引起肺转移而导致预后极差,是骨肉瘤死亡的主要原因之一。PIM是一种原癌基因,目前研究中已发现PIM家族中有PIM1、PIM2和PIM3三个成员,主要涉及细胞周期及代谢的调节、蛋白质的转录与翻译、促进细胞凋亡及介导耐药蛋白的产生,与肿瘤的发生发展密切相关。目的:本实验观察PIM1蛋白在人骨肉瘤组织和相应非癌组织中的表达,并从组织学上进行比较,分析其与骨肉瘤临床病理指标之间的联系;利用RNA干扰技术靶向抑制PIM1基因表达或转染PIM1高表达质粒,观察对骨肉瘤MG63和U2OS细胞株增殖产生的影响。探讨PIM1表达对人骨肉瘤细胞增殖的影响。方法:1.免疫组化SP法及多因素分析统计学方法探讨PIM1在人骨肉瘤组织及相应非癌组织中的表达情况选取2008-2012年期间在大学附属医院的120对人骨肉瘤组织与相应非癌组织标本,通过免疫组化实验分别测定组织中PIM1蛋白表达水平并相互比较。分析PIM1蛋白表达水平与性别、年龄、Enneking分期、肿瘤大小、分化程度、t分期、远处转移和tnm分期等之间的相关性。2.rna干扰、细胞转染后cck8法及平板克隆形成实验观察抑制pim1基因表达对骨肉瘤细胞增殖能力的影响利用靶向干扰pim1基因的sirna转染骨肉瘤mg63和u2os细胞作为实验组,并与阴性对照组(转染阴性载体)及空白对照组(未转染)相比较,采用cck8法及平板克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力,分析抑制pim1基因表达后对细胞增殖产生的影响。3.细胞转染后cck8法检测pim1基因高表达对骨肉瘤细胞增殖能力的影响利用pim1基因过表达质粒转染骨肉瘤mg63和u2os细胞作为实验组,并与阴性对照组(转染空载体质粒)及空白对照组(未转染)相比较。采用cck8法检测各组细胞的增殖能力,分析pim1基因高表达后对细胞增殖产生的影响。结果:1.pim1在人骨肉瘤组织及相应非癌组织中的表达情况pim1蛋白在人骨肉瘤组织中阳性表达率为90.00%(108/120),在相应非癌组织中阳性表达率为73.33%(88/120),pim1蛋白在人骨肉瘤组织中的阳性表达率高于相应非癌组织(p0.05)。而与相应非癌组织相比,pim1蛋白在人骨肉瘤组织中表达上调的有59.17%(71/120),下调的有9.16%(11/120),不变的有31.67%(38/120)。说明pim1蛋白在人骨肉瘤组织中表达水平要高于相应非癌组织(p0.05)。多因素分析显示骨肉瘤组织中PIM1蛋白表达水平与肿瘤大小、Enneking分期和T分期相关,且是一个独立的预后因子。2.干扰了PIM1基因表达的骨肉瘤细胞MG63和U2OS细胞的克隆形成及增殖能力较阴性对照组及空白对照组显著降低(p0.05)。3.转染了PIM1高表达质粒的骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖能力较阴性对照组及空白对照组显著升高(p0.05)。结论:1.PIM1蛋白在人骨肉瘤组织中高表达,且与肿瘤大小、Enneking分期和T分期有关。2.PIM1表达可促进骨肉瘤MG63和U2OS细胞的增殖。
【关键词】：骨肉瘤 PIM1 MG63 U2OS 细胞增殖
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738.1
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 主要英文缩略语11-13
• 第1章 绪论13-17
• 第2章 实验材料17-21
• 第3章 实验方法21-25
• 3.1 免疫组织化学染色SP法21-22
• 3.2 细胞培养22
• 3.3 细胞转染22-23
• 3.4 细胞平板克隆形成实验23
• 3.5 CCK8实验检测细胞增殖情况23-24
• 3.6 统计学分析24-25
• 第4章 实验结果25-32
• 第5章 讨论32-36
• 第6章 结论36-38
• 参考文献38-44
• 综述 MicroRNA 在癌症基因表达中的研究进展44-52
• 参考文献48-52
• 作者攻读学位期间的科研成果52-54
• 致谢54

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