丙戊茶碱抑制脊髓JNK信号通路活化对大鼠趾部切口痛缓解作用的实验研究

发布时间：2017-04-03 01:13

  本文关键词：丙戊茶碱抑制脊髓JNK信号通路活化对大鼠趾部切口痛缓解作用的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨JNK信号通路在大鼠趾部切口痛中的作用及丙戊茶碱(PPF)对该模型大鼠镇痛效应与JNK信号通路的相关关系。方法:成年雄性SD大鼠150只,体重200~250g,依照随机数字表法分为5组(n=30):IP组(切口组),行趾部切口术;DMSO组(10%DMSO组),术前30min鞘内注射10%DMSO 10μl;NS组(生理盐水组),术前30min鞘内注射0.9%生理盐水10μl;SP组(SP600125组),术前30min鞘内注射SP600125 25μg/10μl;PPF组(丙戊茶碱组),术前30min鞘内注射丙戊茶碱10μg/10μl。于趾部切口术前24h、术后2、6、24、48、72h行机械缩痛阈(MWT)、热痛阈(TWL)测试;在术前24h、术后6、24、48、72h行为学测试后取大鼠腰膨大,应用酶联免疫吸附实验(ELISA法)测TNF-α含量,免疫荧光标记染色法观察p-JNK分布及表达,免疫荧光双染色标记法观察p-JNK与腰膨大背角小胶质细胞、星形胶质细胞及神经元的共表达情况;于术后72h进行Western blot检测腰膨大p-JNK的表达量;将所得结果进行统计学分析。结果:1、行为学研究:与术前24h比较,各组术后各时间点MWT、TWL均降低(P0.05),SP组术后72h无明显差异(P0.05);与IP组比较,SP组、PPF组术后各时间点MWT、TWL均升高(P0.05);与SP组比较,PPF组术后2h MWT较低(P0.05),术后6h TWL时长较短(P0.05),但其他各时间点上二组变化相似。2、ELISA法腰膨大TNF-α水平检测:与术前24h比较,各组术后各时间点TNF-α均明显升高,于术后6h达峰(P0.05);与IP组比较,SP组、PPF组在术后各时间点腰膨大TNF-α含量明显降低(P0.05);与SP组比较,PPF组在术后各时间点腰膨大TNF-α含量稍高,差异有统计学意义(P0.05)。3、免疫荧光观察腰膨大p-JNK的表达与分布:与术前24h比较,IP组、SP组术后6、24、48、72h脊髓p-JNK阳性细胞数均增加(P0.05);与IP组比较,SP组在术后6、24、48、72h脊髓p-JNK阳性细胞数均减少(P0.05)。免疫荧光染色显示p-JNK术后6h即有表达,至术后72h升至最高。免疫荧光双染色共表达式结果显示,切口痛模型大鼠脊髓腰膨大中p-JNK主要与小胶质细胞标记物(Iba-1)共表达。4、Western blot检测术后72h腰膨大p-JNK的相对含量:与术前24h比较,术后72h IP组、PPF组脊髓p-JNK含量升高(P0.05),SP组含量减少(P0.05);与IP组比较,SP组和PPF组在术后72h脊髓p-JNK含量均减少(P0.05);与SP组比较,PPF组在术后72h腰膨大处p-JNK含量较多(P0.05)。结论:1、脊髓JNK信号通路活化对大鼠趾部切口痛的产生和维持有促进作用,通过鞘内注射JNK信号通路特异性抑制剂可翻转手术切口诱发的痛觉过敏和痛觉超敏;2、抑制JNK信号通路活化可减少趾部切口术后大鼠腰膨大TNF-α的表达;3、大鼠趾部切口术前鞘内注射丙戊茶碱可通过抑制脊髓小胶质细胞中JNK信号通路活化缓解术后疼痛,同时减少腰膨大TNF-α的含量。
【关键词】：丙戊茶碱 趾部切口痛 c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK) 肿瘤坏死因子α(TNF-α) 胶质细胞
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-11
• 背景回顾11-18
• 1. JNK信号通路与病理性疼痛11-13
• 2. 活化胶质细胞在病理性疼痛中的作用13-14
• 3. 胶质细胞活化抑制药物丙戊茶碱的研究进展14-15
• 4. TNF-α 与病理性疼痛15-18
• 材料与方法18-26
• 1. 实验动物18
• 2. 主要试剂及配制方法18-20
• 3. 主要仪器和设备20
• 4. 实验分组20-21
• 5. 动物模型的建立21
• 6. 鞘内注射给药术21
• 7. 行为学研究21-22
• 8. 灌注、固定及取材22-23
• 9. 免疫荧光染色观察脊髓背角p-JNK的分布及表达23
• 10. ELISA检测腰膨大中TNF-α 含量23-24
• 11. Western Blot定量检测腰膨大处p-JNK的含量24
• 12. 免疫荧光双染色观察脊髓背角p-JNK共表达24-25
• 13. 统计学处理25-26
• 实验结果26-39
• 1. 行为学测试结果26-32
• 1.1 第一部分实验结果26-29
• 1.2 第二部分实验结果29-32
• 2. ELISA检测腰膨大TNF-α 含量结果32-34
• 2.1 第一部分实验结果32-33
• 2.2 第二部分实验结果33-34
• 3. 免疫荧光染色观察结果34-36
• 4. Western blot检测结果36-38
• 4.1 第一部分实验结果36-37
• 4.2 第二部分实验结果37-38
• 5. p-JNK的共表达结果38-39
• 讨论39-43
• 1. 行为学测试结果讨论39-40
• 2. ELISA检测腰膨大TNF-α 含量结果讨论40-41
• 3. 免疫荧光染色观察和Western blot检测结果讨论41-42
• 4. p-JNK的共表达结果讨论42-43
• 结论43-44
• 创新性分析44-45
• 研究的局限性及展望45-46
• 参考文献46-54
• 附录54-60
• 附录一 技术路线图54-55
• 附录二 von Frey纤维丝行为学测量阳性/阴性反应参数表55-56
• 附录三 文中所述部分图片56-58
• 附录四 缩略语58-60
• 在学期间撰写论文60-61
• 致谢61

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