AKT信号通路在机械循环压力作用下对终板软骨退变的影响

发布时间：2017-05-02 01:01

  本文关键词：AKT信号通路在机械循环压力作用下对终板软骨退变的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:在体外大鼠终板软骨细胞培养基础上,建立终板软骨细胞在间歇循环牵张力作用下退变的细胞模型,然后在进一步研究AKT/m TOR信号通路对大鼠终板软骨细胞退变的影响。方法:在实验室于无菌的条件下分离、培养大鼠的终板软骨细胞,然后选择第二代大鼠终板软骨细胞作为实验所用的细胞。建立终板软骨细胞在FX5000-T细胞应力加载系统作用下的软骨细胞退变的模型。具体实验分组为:空白对照组(P2代细胞);实验组1:FX5000-T间歇循环牵张力组;实验组2:FX5000-T间歇循环牵张力及AKT/mTOR细胞信号通路抑制剂组。甲苯胺蓝染色法检测各组终板软骨细胞蛋白聚糖的变化;倒置相差显微镜观察各组终板软骨细胞的形态学变化;免疫印迹法检测AKT、P-AKT以及位于AKT下游的蛋白质表达情况;实时聚合酶链反应检测各组细胞中SOX-9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原以及细胞细胞基质分解代谢基因MMP-3、MMP-13、Adamts-5等相关基因的表达。结果:大鼠的终板软骨细胞在间歇循环牵张力作用下,随着FX5000-T细胞应力加载系统作用时间的进行,大鼠的终板软骨细胞中软骨标志物:SOX9、二型胶原、蛋白聚糖基因的表达逐渐降低,随后又逐渐增高;提示刚开始大鼠终板软骨细胞的细胞外基质合成在刚开始时受到了抑制。在机械循环牵张力的作用下,大鼠的终板软骨细胞中的软骨细胞的基因标志物及AKT/m TOR信号通路的关键的基因以及相关蛋白的表达逐渐降低;抑制AKT/mTOR信号通路后,大鼠软骨细胞的基因标志物的表达明显降低,AKT/mTOR信号通路的相关基因及相关蛋白的表达也明显降低,提示大鼠终板软骨细胞退变的程度明显加重。结论:间歇循环牵张力载荷通过激活AKT/mTOR/P70S6K细胞信号通路,进而诱导大鼠终板软骨细胞的退变。AKT/m TOR/P70S6K信号通路可能在大鼠终板软骨细胞于体外间歇循环牵张力作用下退变的过程中发挥重要的作用,人为的调控或干预AKT/mTOR/P70S6K信号通路的表达可能减缓,或者抑制大鼠终板软骨的退变。
【关键词】：椎间盘 终板软骨细胞 AKT/m TOR/P70S6K 细胞退变
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R681.5
【目录】：

• 中英文缩写、略写词对照表5-9
• 摘要9-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-15
• 研究材料（资料、内容）和方法15-29
• 1. 实验研究内容15-16
• 1.1 建立终板软骨细胞在体外机械循环牵张力作用下退变的模型15
• 1.2 观察机械循环张力加载前后终板软骨细胞的生物学表型改变15
• 1.3 AKT/mTOR信号通路在牵张力诱导终板大鼠软骨细胞退变过程中的作用15-16
• 1.4 抑制AKT/mTOR信号通路后，观察该信号通路在机械循环牵张力诱导下对大鼠终软骨细胞退变的影响16
• 2. 实验材料和实验方法16-28
• 2.1 实验动物16
• 2.2 主要实验试剂及实验仪器16-18
• 2.3 建立大鼠终板软骨细胞体外机械循环牵张力诱导模型18-21
• 2.4 AKT/mTOR信号通路抑制试验21
• 2.5 机械循环牵张力作用前后对终板软骨细胞增殖、凋亡的检测21-23
• 2.6 细胞的甲苯胺蓝染色实验23
• 2.7 Real time RT-PCR法检测mRNA的表达23-26
• 2.8 Western blot法测定蛋白质的表达26-28
• 3 统计学处理28-29
• 结果29-38
• 讨论38-45
• 结论45-46
• 参考文献46-55
• 综述：AKT/m TOR/P70S6K 信号通路在软骨分化及发育中的研究进展55-64
• 参考文献60-64
• 附录64-67
• 作者简介及相关科研成果67-68
• 致谢68-69

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本文编号：339953