利用成骨细胞特异性敲除小鼠研究C/EBPα在骨发育中的作用

发布时间：2024-06-30 01:42

　　骨骼在机体中具有非常重要的作用,骨发育与软骨细胞和成骨细胞的分化功能密切相关。其中成骨细胞是骨发育、骨形成以及骨改建过程中的主要功能细胞,也是人体骨组织的重要组成成分,在骨形成以及骨量维持中起着关键作用。成骨细胞来源于具有多向分化潜能的间充质干细胞,后者经过细胞增殖,合成细胞外基质,逐渐成熟及矿化,最终分化成为骨细胞。间充质干细胞(MSC,mesenchymal stem cells)是干细胞家族的重要成员,在生长过程中具有自我复制能力,还具有强大的多向分化潜能。其在分化过程中能够转化为脂肪、软骨、硬骨或者其他类型的细胞。骨的形成是MSCs通过迁移、增殖、分化,在骨吸收部位形成成骨细胞,并介导新骨组织形成的过程,其中MSCs的成骨分化是骨形成的核心过程。一旦成骨细胞分化产生异常,就会对骨发育与骨重建产生重要影响,会带来比如骨质疏松等诸多和骨代谢相关的疾病。目前临床医学和基础医学均对MSCs成骨分化机制的研究十分关注,尤其针对调控信号和一些重要的成骨转录因子的研究已经成为该领域的热点话题,但对于MSCs的成骨分化原理和分子机制的研究依然存在很多盲区,因此当前对临床骨代谢相关疾病的治疗存在...

【文章页数】：81 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英汉缩略语名词对照
中文摘要
英文摘要
前言
实验研究
    1. 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验仪器
        1.3 实验试剂
        1.4 缓冲液配方及制备方法
        1.5 实验耗材
    2. 实验方法
        2.1 鉴定小鼠基因型
            2.1.1 鼠尾DNA的提取步骤
            2.1.2 用PCR的方法鉴定基因型
        2.2 小鼠组织学分析
            2.2.1 小鼠腿骨样本收样
            2.2.2 X-射线和Micro-CT扫描分析骨结构
            2.2.3 石蜡包埋和骨组织切片
            2.2.4 HE染色
            2.2.5 TRAP染色
            2.2.6 ALP碱性磷酸酶染色
            2.2.7 PCNA染色
        2.3 小鼠原代成骨细胞培养及功能检测
            2.3.1 原代成骨细胞的培养
            2.3.2 成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）染色
            2.3.3 成骨细胞矿化检测（Von Kossa）
        2.4 成骨细胞中基因表达量的检测
            2.4.1 RNA抽提
            2.4.2 逆转录反应
            2.4.3 qRT-PCR
            2.4.4 Western印迹实验
        2.5 小鼠骨架染色
        2.6 数据分析
    3. 实验结果
        3.1 C/EBPα在软骨细胞特异性敲除后对骨发育的影响
            3.1.1 C/EBPα f/f;Col2a-cre基因敲除小鼠的表型研究
            3.1.2 C/EBPα影响小鼠生长板的发育
            3.1.3 C/EBPα影响软骨细胞的增殖
        3.2 C/EBPα在成骨细胞特异性敲除后对骨发育的影响
            3.2.1 C/EBPα f/f;Osx-cre基因敲除小鼠的基因型鉴定
            3.2.2 C/EBPα f/f;Osx-cre基因敲除小鼠表型研究
            3.2.3 C/EBPα f/f;Osx-cre基因敲除小鼠的骨密度降低
            3.2.4 C/EBPα f/f;Osx-cre基因敲除小鼠的骨体积明显下降
            3.2.5 C/EBPα f/f;Osx-cre基因敲除小鼠骨吸收能力降低
            3.2.6 C/EBPα在成骨细胞中被有效敲除
            3.2.7 敲除C/EBPα影响成骨细胞功能和矿化能力
            3.2.8 敲除C/EBPα影响成骨细胞分化
    4. 讨论和总结
参考文献
文献综述 间充质干细胞成骨分化的研究进展
    参考文献
致谢
博士期间发表论文



本文编号：3998208