低氧预处理脂肪干细胞—胞外囊泡促进皮瓣移植后血管新生的实验研究

发布时间：2025-01-06 03:39

　　目的:近年来,人脂肪来源间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hASCs)在组织修复重建领域应用广泛,并且大量研究表明hASCs发挥的疗效主要归功于其旁分泌产生的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)。随着进一步的深入研究,发现EVs的功能受hASCs所处的微环境影响。因此,本研究旨在模拟生理性低氧环境来培养hASCs,从而获得低氧hASC-EVs,随后对低氧hASC-EVs能否促进皮瓣移植的修复进行评估,并进一步探讨其机制。方法:实验方案主要分为两大部分:(1)在体外,分别将常氧hASC-EVs和低氧hASC-EVs(低氧预处理的hASC所释放的EVs)与人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养,通过CCK-8、划痕试验、Matrigel成管实验来评估它们的促增殖、迁移和管样分化能力;并通过超氧化物歧化酶、丙二醛试剂盒及流式细胞术检测其改善氧化应激和细胞凋亡的能力。(2)将SD大鼠随机分为3组,背部制作一个9×3c...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 前言
第2章 材料与方法
    2.1 实验动物
    2.2 主要试剂及仪器
    2.3 方法
        2.3.1 人脂肪来源间充质干细胞的分离、培养及鉴定
        2.3.2 hASC-EVs的收集、分离及鉴定
        2.3.3 PKH26 示踪hASC-Evs的转移
        2.3.4 体外检测hASC-Evs能否促进血管新生
        2.3.5 体外检测hASC-Evs能否改善氧化应激
        2.3.6 体外检测hASC-Evs能否改善细胞凋亡
        2.3.7 动物模型制备及分组
        2.3.8 动物模型检测指标
        2.3.9 数据统计
第3章 实验结果
    3.1 hASCs的细胞形态及鉴定
    3.2 常氧hASCs-EVs与低氧hASCs-EVs的鉴定及差异分析
    3.3 观察hASC-EVs能否被HUVECs摄取
    3.4 体外检测hASC-Evs能否促进血管新生
        3.4.1 CCK-8 增殖实验
        3.4.2划痕实验
        3.4.3 Matrigel成管实验
    3.5 体外检测hASC-Evs能否改善氧化应激的实验结果
    3.6 体外检测hASC-Evs能否改善细胞凋亡的实验结果
    3.7 动物实验结果
        3.7.1 术后第7 天皮瓣大体观察
        3.7.2 组织HE和免疫组化结果
        3.7.3 PCR检测大鼠皮瓣HIF-1α和VEGF mRNA水平的结果
第4章 讨论
第5章 结论
本研究创新性自我评价
致谢
参考文献
攻读学位期间研究成果
综述
    参考文献



本文编号：4023733