表面分子CD25的下调延长同种异体角膜植片存活的实验研究

发布时间：2017-10-11 15:19

  本文关键词：表面分子CD25的下调延长同种异体角膜植片存活的实验研究

  更多相关文章： CD25 角膜移植排斥反应 细胞因子 树突状细胞

【摘要】：目的:一、通过建立同种异体大鼠的角膜移植实验模型,探讨CD25-siRNA基因治疗能否抑制角膜移植免疫排斥反应,及其机制是否与调节Treg/Th1细胞因子的表达有关。二、通过建立同种异体小鼠的高危角膜移植实验模型,探讨CD25单抗、雷帕霉素的效应是否与DC细胞、Treg细胞的调节有关。方法:一、Wistar大鼠作为供体,SD大鼠作为受体,构建大鼠的角膜移植模型。将术后大鼠随机分为3组,分别为移植对照组、无义siRNA转染组和CD25-siRNA转染组。术后1周后开始,每天对植片行临床评分。于术后14天行HE染色检测角膜组织病理情况,行免疫组化检测IL-10、TGF-β、IFN-γ、IL-1β、TNF-α和Foxp3因子的表达。分别于术后3、7、14、21天行流式检测术后大鼠外周血中CD4+T细胞的比例。二、C57BL/6小鼠作为供体,Balb/c小鼠作为受体,受体右眼角膜缝线后2周行穿透性角膜移植手术,构建小鼠的高危角膜移植模型。将术后小鼠随机分为4组,分别为移植对照组、CD25单抗组、雷帕霉素组和cd25单抗联合雷帕霉素组。于术后12天行he和dc细胞的免疫组化。术后第12天应用流式细胞仪分析各组小鼠引流淋巴结、脾脏中cd4+t,treg细胞,dc细胞的比例;应用qrt-pcr分析各组植片和引流淋巴结中细胞因子(ifn-γ、il-2、il-1β和tgf-β)的mrna表达水平。术后4周内每日观察角膜植片的存活情况。结果:一、在wistar—sd大鼠低危角膜移植模型中,与移植对照组、无义cd25sirna转染组相比,cd25sirna转染组植片浑浊、水肿及新生血管化指标的评分减低,角膜植片的存活时长显著增加(p0.05)。术后第14天免疫组化显示,cd25-sirna转染组的il-10、tgf-β的表达高于另外两组;ifn-γ、tnf-α和il-1β的表达低于另外两组;而foxp3的表达三组之间无显著差异。术后3、7、14、21天,对照组外周血cd4+t淋巴细胞亚群比例逐渐增加,而cd25-sirna转染组的每个时间点,cd4+t细胞的比例都低于对照组(p0.05)。二、在c57bl/6—balb/c小鼠高危穿透性角膜移植模型中,与对照组相比,干预组植片的存活时长显著增加(p0.05)。术后第12天,cd25单抗组、雷帕霉素组和cd25单抗联合雷帕霉素组3组植片的炎症减轻,dc细胞在植片的分布减少,引流淋巴结中dc细胞和cd4+t细胞所占比例减少。雷帕霉素组淋巴结的treg细胞比例高于对照组,cd25单抗组低于对照组,而联合干预组treg细胞保持在对照组的一致水平。术后12天于对照组相比,3组干预组植片的ifn-γ、il-2、il-1βmrna明显降低,此外,cd25单抗组、cd25单抗联合雷帕霉素组的TGF-βmRNA显著升高。结论:一、下调表面分子CD25的表达能有效抑制角膜移植排斥反应的发生,延长角膜植片的存活时间。二、CD25的下调减轻排斥反应的机制,可能通过增加IL-10、TGF-β的表达,降低IFN-γ、IL-1β和TNF-α的表达来完成。三、CD25的下调减轻排斥反应的机制还可能通过抑制DC细胞成熟、迁移有关。
【关键词】：CD25 角膜移植排斥反应 细胞因子 树突状细胞
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R779.65
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 CD25siRNA对同种异体角膜移植中Treg/Th1细胞因子的表达的影响15-23
• 1 材料与方法15-17
• 1.1 材料15-16
• 1.2 方法16-17
• 1.2.1 角膜移植模型的建立16
• 1.2.2 实验分组16
• 1.2.3 临床观察及评分16-17
• 1.2.4 术后植片组织病理学及Treg/Th1细胞因子的免疫组化检查17
• 1.2.5 外周血的CD4+ T细胞的流式检测17
• 1.2.6 统计学分析17
• 2 结果17-21
• 2.1 角膜移植术后临床观察及评分17-19
• 2.2 角膜植片HE及免疫组织化学染色结果19-20
• 2.3 术后外周血CD4+ T细胞的结果20-21
• 3 讨论21-23
• 第二部分CD25单抗联合雷帕霉素在高危同种异体角膜移植中对树突状细胞和Treg细胞的影响23-34
• 1 材料与方法23-26
• 1.1 材料23
• 1.2 方法23-26
• 1.2.1 小鼠高危角膜移植模型的建立23-24
• 1.2.2 实验分组24
• 1.2.3 临床观察及评分24
• 1.2.4 术后植片组织病理学及DC细胞的免疫组化检查24
• 1.2.5 引流淋巴结、脾脏的DC，CD4+ T和Treg细胞的流式检测24-25
• 1.2.6 植片和引流淋巴结细胞因子的m RNA检测25
• 1.2.7 统计学分析25-26
• 2 结果26-30
• 2.1 小鼠高危角膜移植术后临床观察及评分26
• 2.2 角膜植片HE及DC细胞的免疫组织化学染色结果26-27
• 2.3 淋巴结、脾脏的流式检测的结果27-29
• 2.4 植片和淋巴结中细胞因子的表达29-30
• 3 讨论30-34
• 全文小结34-35
• 参考文献35-38
• 文献综述38-49
• 参考文献45-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间发表的文章50

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 Tanhehco T.Y.;Chiavetta III S.V.;Lee P.P. et al.;N.A. Afshari;杨建刚;;角膜植片上的“碎泥巴”样环丙沙星沉积物[J];世界核心医学期刊文摘.眼科学分册;2005年09期

2 王婷;史伟云;高华;方淑芬;赵靖;谢立信;;穿透性角膜移植术后角膜植片哆开调查分析[J];中国实用眼科杂志;2006年09期

3 曲利军;赵靖;史伟云;高华;谢立信;;穿透性角膜移植术后角膜植片内皮慢性失功的临床分析[J];眼科;2009年03期

4 吴永强;;视网膜脱离复位术对透明角膜植片的影响[J];国外医学.眼科学分册;1987年02期

5 谢立信;董晓光;王杰;;桥式角膜植片在治疗性穿透性角膜移植术中的应用[J];潍坊医学院学报;1989年02期

6 范玉香,徐深,候四清;部分穿透性角膜移植术后二期人工晶体植入[J];中国实用眼科杂志;1998年08期

7 安刚,路璐,许苑;光学性角膜移植术后角膜植片对视力康复的影响[J];中国临床康复;2004年08期

8 郭滨;程钧;孙亚杰;谢立信;;增视性角膜移植术后角膜植片透明率及影响因素[J];国际眼科杂志;2012年04期

9 张樱楠;闫超;王立;刘静;潘志强;;不同种族角膜植片对穿透性角膜移植术效果的影响[J];眼科;2013年02期

10 韩波;胡燕华;;高表达吲哚胺2,3-二氧化酶的树突状细胞对角膜植片存活时间的影响[J];眼视光学杂志;2007年02期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 高华;角膜植片慢性失功发生机理的实验研究[D];青岛大学;2007年

2 魏安基;二次穿透性角膜移植术后的临床结果及角膜各项指标的观察[D];复旦大学;2013年

3 贾亮;局部应用鞘氨醇-1-磷酸受体调节剂1抑制小鼠同种异体角膜移植排斥的研究[D];中国人民解放军医学院;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前7条

1 罗丹;表面分子CD25的下调延长同种异体角膜植片存活的实验研究[D];重庆医科大学;2016年

2 黄竹;IL-10基因转染在大鼠角膜移植排斥反应中的作用[D];辽宁医学院;2013年

3 陈敏;CTLA4-FasL融合蛋白抑制小鼠角膜移植免疫排斥反应的实验研究[D];青岛大学;2005年

4 徐岩泽;家兔血管内皮细胞替代自体角膜内皮细胞的实验研究[D];昆明医学院;2007年

5 苏海英;CD86及NF-κB在IL-10修饰的DC诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用[D];辽宁医学院;2011年

6 李斐;结膜下注射间充质干细胞对大鼠角膜移植排斥作用的研究[D];天津医科大学;2014年

7 田丽华;外源性IL-10转染大鼠DC细胞诱导角膜移植免疫耐受的研究[D];辽宁医学院;2012年

，

本文编号：1013257