转染hTERT基因对人角膜内皮细胞增殖及功能维持的影响

发布时间：2017-11-07 15:39

  本文关键词：转染hTERT基因对人角膜内皮细胞增殖及功能维持的影响

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【摘要】：目的探索转染人端粒酶催化亚单位(TERT)促进人角膜内皮细胞(HCECs)增殖并进行长期培养的可行性。方法原代HCECs生长到80%融合时,采用脂质体介导的方法将质粒p EGFP-N1和p BABE-puroh TERT转染到HCECs,1μg/m L嘌呤霉素筛选。RT-PCR和Western blot检测嘌呤霉素耐药克隆中TERT的表达情况。阳性克隆进行传代培养。MTT法和细胞周期检测比较细胞的生长增殖能力;透射电镜检测细胞的超微结构,RT-PCR检测泵功能相关基因的表达,Western blot检测Na+/K+-ATPaseα1的表达,免疫荧光检测ZO-1、N-cadherin的表达。结果 TERT-HCECs表达了外源的TERT已经传到36代,保持了正常的HCECs形态且比HCECs具有更强的增殖能力;泵功能相关基因、Na+/K+ATPaseα1、ZO-1的表达在TERT-HCECs和HCECs中差异无统计学意义。TERT-HCECs能形成单层结构,并保持与原代HCECs细胞相似的泵功能。结论通过转染TERT,建立了一株与原代生理功能相近且具有更强增殖能力的TERT-HCECs。
【作者单位】： 广州医科大学附属第二医院眼科;中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室;
【基金】：国家自然青年科学基金资助项目(编号:81300732) 广东省医学科研基金立项课题(编号:B2013305) 广东省自然科学基金面上项目(编号:2014A030313487)
【分类号】：R77
【正文快照】： 510060)人角膜内皮细胞(human cornealendothelial cells,HCECs)来源于与神经板分离的神经嵴细胞,位于角膜最内面,前面与后弹力层相连,后面接触房水,是一层六角形立方上皮细胞。HCECs通过屏障功能和水泵机制保持角膜的透明性[1],其在体内不能增殖[2],伴随着年龄的老化[3]、眼

【相似文献】

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1 闵晓洁;周庆军;刘廷;董晓光;谢立信;;TERT在视网膜新生血管模型中的动态表达及与Bcl-2的关系[J];眼科新进展;2009年04期

2 康凤英,薛黎平;端粒酶催化亚单位TERT在实验性外伤性PVR视网膜前膜的动态表达(英文)[J];国际眼科杂志;2004年02期

3 薛黎萍,康凤英,胡世兴,邓新国,林少春;大鼠外伤性PVR视网膜前膜形成中TERT、PCNA和Bcl-2的变化(英文)[J];国际眼科杂志;2005年01期

4 ;[J];;年期

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本文编号：1153059