miR-222通过靶向RB1促进视网膜母细胞瘤细胞生长与侵袭

发布时间：2017-12-18 09:17

  本文关键词：miR-222通过靶向RB1促进视网膜母细胞瘤细胞生长与侵袭

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【摘要】：背景与目的:视网膜母细胞瘤基因1(retinoblastoma 1,RB1)能够抑制多种肿瘤的发生、发展,且与细胞周期、分化、衰老、凋亡及生长抑制等调控密切相关。该研究旨在明确miR-222是否通过靶向RB1表达而促进视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭,进一步揭示miR-222促瘤作用的分子机制。方法:将miR-222(miR-222模拟物)+RB1-wt(野生型RB1的3’-非翻译区的荧光素酶报告载体)、miR-NC(无关序列对照)+RB1-wt、miR-222+RB1-mut(突变型RB1的3’-非翻译区的荧光素酶报告载体)及miR-NC+RB1-mut共转染人视网膜母细胞瘤细胞株Y79,并采用单光子检测荧光素酶活性。采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测RB1表达水平的改变。将miR-222与miR-NC、RB1(pc DNA3.1-RB1)与vector(pc DNA3.1)、miR-222+RB1及miR-NC+vector转染Y79细胞,MTS检测细胞生长增殖活性,Transwell侵袭实验检测Y79细胞生长与侵袭能力的影响。结果:与miR-NC+RB1-wt组比较,共转染miR-222+RB1-wt组的荧光素酶活性强度降低了约56.67%(P0.05)。与miR-NC比较,miR-222组RB1蛋白水平显著下调(P0.05)。转染miR-222组细胞生长速度显著高于miR-NC组(P0.05)。与pc DNA3.1组比,pc DNA3.1-RB1组可显著抑制Y79细胞的生长(P0.05),而miR-222+pc DNA3.1-RB1组和miR-NC+pc DNA3.1组比较,细胞生长速度差异无统计学意义(P0.05)。转染miR-222组穿过基底膜的细胞数分别为(193±10),与对照组(144±11)比较能明显加快Y79细胞的穿膜能力,差异有统计学意义(P0.05)。而miR-NC+pc DNA3.1组和miR-222+pc DNA3.1-RB1组比较,穿过基底膜的细胞数差异无统计学意义(P0.05)。结论:miR-222通过靶向调控RB1表达而促进视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭。
【作者单位】： 湖北医药学院附属十堰市太和医院眼科中心;湖北医药学院附属十堰市太和医院心胸外科;
【基金】：湖北省教育厅科学研究计划指导性项目(B2015477) 十堰市科技课题(14Y40)
【分类号】：R739.7
【正文快照】： Micro RNAs(mi RNAs)是内源性非编码小分子RNA,其长度为19~25 bp,通过与m RNA的3’-UTR区域完全或者不完全配对,促进m RNA的降解和(或)阻碍其翻译,在转录后水平上对其表达进行负调控,调控过程涉及到个体发育、细胞增殖与分化及凋亡多种生命活动[1]。mi RNA与肿瘤的发生、发展

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本文编号：1303618