SHISA3基因在喉癌中的甲基化状态及其临床意义分析

发布时间：2018-03-03 18:31

本文选题：SHISA3　切入点：启动区甲基化　出处：《宁波大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的喉癌(Laryngeal cancer)是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,近年来喉癌的发病率呈现上升的趋势,和其它肿瘤一样,喉癌的发生发展是一个多阶段、多步骤,涉及遗传、表观遗传和环境暴露等多因素影响的复杂过程。DNA甲基化作为表观遗传最主要的组成部分,已被证实与多种肿瘤的发生发展密切相关。SHISA3是最新发现的一个候选抑癌基因,已有报道其在肺癌和结直肠癌中可通过启动子区高甲基化引起基因表达沉默,从而参与肿瘤发生发展。但SHISA3在喉癌发生发展中的作用尚不清楚。因此,本研究探讨SHISA3基因启动子甲基化与喉癌发生发展的相关性,评价其作为喉癌诊断及预后分子标志物的潜在价值。方法1.用MEPRESS在线分析网站(http://mexpress.be/)分析The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库中头颈部鳞癌中SHISA3基因的甲基化及表达情况。2.经医院伦理委员会批准,收集93对喉癌患者的癌组织及癌旁正常组织,整理临床病理资料。3.甲基化特异性PCR法(Methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)检测93对喉癌患者的癌组织及癌旁正常组织中SHISA3基因启动子甲基化状态。4.荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,qRT-PCR)检测35对喉癌组织和癌旁组织中SHISA3 mRNA表达水平。5.应用双荧光素酶报告基因实验检测MSP检测的SHISA3基因甲基化片段是否具有调节基因表达的功能。6.卡方检验和Fisher确切概率法用于SHISA3启动子甲基化的比较及与临床资料的相关性的分析。采用配对样本t检验进行两组间SHISA3基因表达水平的比较。绘制受试者工作曲线(the receiver operating characteristic,ROC)曲线并计算曲线下面积(the area under the curve,AUC)评价SHISA3甲基化对喉癌的诊断价应用值。Log-rank检验和多元Cox风险比例模型评价SHISA3甲基化对喉癌预后的预测价值。结果1.通过MEXPRESS对TCGA数据库中头颈部鳞癌标本的分析,发现SHISA3基因启动子区域的甲基化水平在癌组织显著升高,并且与其表达水平呈负相关。2.MSP结果表明喉癌组织中SHISA3基因启动子区的甲基化率显著高于癌旁正常组织(P=4.58E-12)。3.进一步分析喉癌患者的临床数据发现SHISA3基因甲基化状态与低分化(P=0.02)、淋巴结转移(P=0.03)、临床晚期(P=0.02)和高T分级(P0.05)等临床资料密切相关。4.q RT-PCR检测发现SHISA3基因在35例喉癌组织中的表达水平较癌旁正常组织显著下调(P=3.84E-05),且甲基化的喉癌患者中SHISA3基因的表达水平显著低于未发生甲基化的喉癌患者(P=1.67E-03)。5.双荧光素酶报告基因实验发现,插入的被MSP检测的SHISA3启动子区域片段具有增强下游基因表达的功能(P0.05)。6.构建ROC曲线,曲线下面积为0.91(P0.01)。构建生存曲线,Log-rank检验发现SHISA3基因甲基化组的生存率显著差于未甲基化组病人(P=0.024)。采用多元Cox风险比例模型对年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤分化程度和临床分期进行校正,甲基化组的喉癌病人较未甲基化组的病人的死亡风险比为2.71,可信区间为1.024 7.177(P=0.047)。结论SHISA3基因启动子区高甲基化可通过抑制其基因表达在喉癌的发生、发展和转移过程发挥重要作用,可能是喉癌诊断及评判预后的一个潜在分子标志物。
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【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.65

【参考文献】