利用CRISPR-Cas9系统敲除小鼠黑色素瘤细胞系MATP基因的初步研究

发布时间：2018-03-16 13:34

  本文选题：CRISPR-Cas　切入点：黑色素瘤细胞　出处：《中国比较医学杂志》2017年04期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的利用CRISPR/Cas9系统,敲除小鼠黑色素瘤细胞系的MATP基因,为MATP基因的功能研究奠定基础。方法利用http://crispr.mit.edu/网站,设计针对MATP的特异性引物,并将引物链接到pCAS9/gRNA1载体。将阳性载体转染小鼠黑色素瘤细胞系B16F10,利用无限稀释的方法获得转染后的单克隆细胞株。提取不同细胞株的基因组,通过测序的方法进一步筛选出发生MATP基因切割的细胞株,并利用Western-blot的方法验证MATP的表达情况。结果成功获得了3株MATP基因敲除的细胞株,Western-blot结果表明,该细胞株不表达MATP蛋白。结论利用pCAS9/gRNA1载体,可以实现B16F10细胞系MATP基因的敲除。
[Abstract]:Objective to knockout the MATP gene of murine melanoma cell line by CRISPR/Cas9 system, and to lay a foundation for the study of the function of MATP gene. Methods using http://crispr.mit.edu/ website, specific primers for MATP were designed. The primer was linked to the pCAS9/gRNA1 vector. The positive vector was transfected into mouse melanoma cell line B16F10. The transfected monoclonal cell line was obtained by infinite dilution method. The genome of different cell lines was extracted. The MATP gene cleavage cell lines were further screened by sequencing, and the expression of MATP was verified by Western-blot. Results three MATP gene knockout cell lines were successfully obtained by Western-blot. Conclusion the MATP gene knockout of B16F10 cell line can be realized by using pCAS9/gRNA1 vector.
【作者单位】： 军事医学科学院实验动物中心;
【基金】：国家自然科学基金31272387 全军实验动物专项课题SYDW[2014]006
【分类号】：R77

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本文编号：1620141