CDMP1基因转染BMSC_S修复喉软骨缺损的实验研究

发布时间：2018-06-15 22:57

  本文选题：软骨组织工程 + 软骨源性形态发生蛋白　； 参考：《辽宁医学院》2012年硕士论文

【摘要】：目的 探讨CDMP1基因转染的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymalstem,BMSCs）负载于聚乳酸-羟基乙酸共聚物（Poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA）上修复喉软骨缺损的能力，初步评估其修复效果，为耳鼻咽喉头颈外科及临床相关科室遇到的软骨缺损修复和功能重建提供新的途径和方法。 方法 无菌条件下，取1月龄新西兰兔的股骨骨髓,采用全骨髓培养法和密度梯度离心法相结合的优化方案分离、纯化BMSCs，并体外传代培养。取第3代的BMSCs分为以下3组,A组（转染组）：感染Ad-CMV-hCDMP1-IRES-eGFP；B组（未转染组）：感染Ad-CMV-eGFP；C组（对照组）：未感染病毒。逆转录聚合酶链式反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）和免疫印迹法(western blot)检测hCDMP1mRNA和蛋白质的表达，，并检测细胞增殖能力(Thiazolyblue, MTT法)、Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ,ColⅡ)以及糖胺聚糖(Glycosaminogl-ycans,GAG)的表达。全麻下制作甲状软骨缺损模型，将实验动物分为3组，Ⅰ组:植入A组细胞/支架复合物，Ⅱ组:植入C组细胞/支架复合物，Ⅲ组:植入单纯支架，每组8只。分别于术后4周和8周无痛处死动物，进行大体观察及组织学检测。 结果 传代培养的BMSCs具有活跃的增殖能力，腺病毒携带hCDMP1基因转染BMSCs未引起BMSCs的过度增殖或抑制；与B、C组比较,A组的Ⅱ型胶原蛋白和糖胺聚糖表达水平均显著提高。动物实验Ⅰ组的软骨缺损处有软骨细胞生长，缺损处表面光滑，可见新生细胞分泌软骨细胞基质糖胺聚糖和Ⅱ型胶原蛋白增加，而Ⅱ组和Ⅲ组的软骨缺损处只有纤维组织修复，表面凹陷粗糙。 结论 1.全骨髓培养法和密度梯度离心法二者结合的优化方案是一种简单实用的分离培养BMSCs的方法，可获得纯度较高的兔BMSCs。 2.以腺病毒为载体基因转染的方法能将外源hCDMP1基因成功转入BMSCs，并使hCDMP1基因获得稳定表达。 3.转染hCDMP1基因的BMSCs分泌Ⅱ型胶原蛋白、糖胺聚糖等软骨特异性基质的能力增强，有促进BMSCs向软骨细胞分化的能力。 4.转染hCDMP1基因的BMSCs与PLGA三维生物支架复合可成功修复喉软骨缺损。
[Abstract]:Objective to investigate the ability of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) transfected with CDMP1 gene to repair laryngeal cartilage defects on poly (lactic acid-glycolic acid) copolymers (Poly (lactic actic-co-glycolic acidacidacidacidacidacidae), and to evaluate the repair effect of CDMP1 gene transfected bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). To provide a new approach and method for repair and functional reconstruction of cartilage defects in otolaryngopharyngeal head and neck surgery and clinical departments. Methods the femur bone marrow of New Zealand rabbits of one month old was isolated under aseptic condition. The whole bone marrow culture method and density gradient centrifugation were used to purify BMSCs and cultured in vitro. The third passage BMSCs were divided into the following three groups: group A (transfection group: infected with Ad-CMV-hCDMP1-IRES-eGFPB group) (untransfected group: infected with Ad-CMV-eGFPC group (control group: uninfected virus). Reverse transcription-Polymerase chain reaction (reverse Transcription-Polymerase chain reaction RT-PCRR) and Western blot (Western blot) were used to detect the expression of hCDMP1 mRNA and protein, and the expression of Thiazolyy, MTT, Collagen 鈪

本文编号：2023988