miR-31调控人角膜缘干细胞自我更新和分化的机制研究

发布时间：2018-06-23 05:14

  本文选题：人角膜缘干细胞 + microRNAs　； 参考：《广东医学》2017年08期

【摘要】：目的探讨microRNA-31(miR-31)对在胚胎干细胞微环境中培养的角膜缘干细胞(LSCs)自我更新与分化的调控作用。方法采用CnT-20,添加20%胚胎干细胞培养上清液(ESC-CM),对LSCs进行培养。将ESC-CM组细胞进行转染miR-31或者Antago-31,检测细胞克隆形成能力的改变;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡的改变,qPCR检测FIH-1、P21、P63、ABCG2、CK3、miR-31、miR-143、miR-145、miR-184的表达情况;免疫荧光与Western blot检测CK3、Cx43 P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、P21、Caspase-3等的表达情况。结果 miR-31 mimic组细胞的CFE明显低于miR-31 inhibitor组[(3.00±1.00)%vs.(6.90±0.79%),P0.05];Antago-31组细胞的CFE[(8.90±0.53)%vs.(7.27±0.80),P0.05]则显著高于Ir-antago组。miR-31mimic组进入S期细胞的比例[(9.33±2.88)%vs.(16.00±1.73)%,P0.05]明显低于miR-31 inhibitor组;Antago-31组进入S期细胞的比例[(22.33±2.58)%vs.(15.33±0.58)%,P0.05]则显著高于Ir-antago组。miR-31mimic组细胞凋亡的比例[(31.13±7.56)%vs.(4.83±0.38%),P0.05]明显高于miR-31 inhibitor组;Antago-31组细胞凋亡的比例[(3.03±0.23)%vs.(5.93±1.53%),P0.05]则显著低于Ir-antago组。在进行miR-31mimc处理之后,P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、miR-143、miR-145的表达量下降,而P21、Cx-43、CK3、miR-31、miR-184的表达量明显上升(P0.05)。在antago-31处理组,P63、ABCG2、Survivin、FIH-1、miR-143、miR-145的表达量上升,而P21、Cx-43、CK3、miR-31、miR-184的表达量明显下降(P0.05)。Caspase-3的表达水平在antago-31处理组一直维持在相对较低的水平。结论通过转染Antago-31提高了FIH-1在LSCs中的表达水平,并减少了P21的表达。miR-31表达水平的下调促进了LSCs干性的维持。ESC-CM通过抑制miR-31/FIH-1/P21部分调控了LSCs的更新与分化。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of microRNA-31 (miR-31) on the self-renewal and differentiation of limbal stem cells (LSCs) cultured in embryonic stem cell microenvironment. Methods LSCs were cultured with CnT-20 and 20% ESC-CM. ESC-CM cells were transfected with miR-31 or Antago-31to detect the change of cell clone formation ability, the cell cycle was analyzed by flow cytometry, and the apoptosis was detected by qPCR. 缁撴灉 miR-31 mimic缁勭粏鑳炵殑CFE鏄庢樉浣庝簬miR-31 inhibitor缁刐(3.00卤1.00)%vs.(6.90卤0.79%),P0.05];Antago-31缁勭粏鑳炵殑CFE[(8.90卤0.53)%vs.(7.27卤0.80),P0.05]鍒欐樉钁楅珮浜嶪r-antago缁，

本文编号：2055940