2型糖尿病听力损害机制与Cx26、Cx30关系的探讨性研究

发布时间：2018-10-11 12:46

【摘要】：目的：糖尿病是一种由多种因素相互作用造成的以高血糖为主要特征的慢性代谢性疾病。随着社会经济的发展和人口老龄化，其患病率逐年增高，其中，糖尿病确诊病例中有90%为2型糖尿病，其慢性并发症严重影响着人们的生活质量。1857年Jordao首次报道了糖尿病听力损伤，引起人们广泛的关注，并进行了大量的研究。目前国内外学者主要从血管病变、神经病变、代谢异常、遗传基因学等方面对糖尿病听力损伤的发病机制进行研究，多数报道认为由毛细胞损伤最终导致听力损害，但导致毛细胞损伤的具体机制仍没有明确。近年来的研究发现缝隙连接通道(Gap JunctionChannel, GJC)在耳蜗中为细胞间通信和物质交流提供了桥梁作用，以保证内淋巴液中的高K＋浓度和内淋巴液稳态，从而实现耳蜗的声音信号传导功能。耳蜗中构成缝隙连接的连接蛋白（Connexin, Cx）主要为Cx26和Cx30,临床上由两者突变造成的听力损失表现为进行性高频下降，这与糖尿病听力损伤的临床表现相似；生理学上由两者突变造成听力损失的机制可能为两者构成的缝隙连接通道功能出现异常，从而影响内淋巴液中K+浓度和内淋巴液稳态，进而使毛细胞变性，从而导致听觉传导异常。Cx26和Cx30在2型糖尿病大鼠耳蜗中表达情况如何以及与听力变化是否有关，目前国内外还没有相关研究。本实验在建立2型糖尿病大鼠模型的基础上，,通过测定糖尿病大鼠早期的听力学改变，采用耳蜗切片HE染色、免疫荧光组织化学染色观察在不同时间正常大鼠和2型糖尿病大鼠耳蜗中Cx26和Cx30的变化，从分子生物学水平探讨Cx26和Cx30在2型糖尿病早期听力损伤发生、发展过程中的作用方法：选用健康、清洁级雄性Wistar大鼠60只，无噪音接触史，耳廓反应灵敏，体重180±20g。适应性喂养1周后将其随机分为对照组20只、实验组40只。对照组喂食常规饲料、实验组喂食高糖高脂饲料8周后两组动物全部禁食不禁水12小时，对照组大鼠按30mg/Kg腹腔注射柠檬酸缓冲液，实验组大鼠按30mg/Kg腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）。于第9周末取大鼠尾静脉全血测空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)＞7.8mmol/L且伴有胰岛素抵抗为2型糖尿病动物模型。期间记录正常组、实验组造模前的体重，以及成模后第4周、8周、12周、16周、20周的体重、空腹血糖和尿糖；观察各组大鼠活动、摄食、尿量、尿味、全身毛发，耳廓反应的变化。两组大鼠在造模前及造模成功后第4周、8周、12周、16周、20周分别接受听觉脑干反应（auditory brainstem response，ABR）测试。对照组和实验组大鼠在成模后第4周、8周、12周、16周、20周分别分批在全麻下进行全身灌注、断头、取出耳蜗、固定、脱钙，制作耳蜗石蜡切片进行HE染色和免疫荧光组织化学染色观察耳蜗形态变化和Cx26、Cx30在耳蜗内表达变化。计量资料结果以均数±标准差（χ±s）表示，两样本均数比较采用t检验或秩和检验，以P0.05为存在显著性差异作为判断标准。结果： 1一般观察结果实验组大鼠表现为多食、多饮、多尿、尿膻味明显，随病情发展，逐渐出现全身毛失去光泽、脱毛、明显消瘦、活动减少、瘙痒等症状，耳廓反应不灵敏。对照组大鼠外观表现为正常，毛发光泽，无消瘦；耳廓反应灵敏。 2体重变化造模前和造模后4周实验组和对照组大鼠体重无显著性差异(P0.05)，造模后8周、12周、16周、20周实验组大鼠体重明显低于对照组大鼠，两组比较有显著性差异(P0.01)。 3空腹血糖、尿糖变化造模后4周、8周、12周、16周、20周实验组大鼠空腹血糖始终＞7.8mmol/L,对照组大鼠空腹血糖始终＜7.8mmol/L,两组比较有显著性差异(P0.01)；造模后实验组大鼠尿糖始终为＋＋＋＋，对照组大鼠尿糖一直为±。 4ABR各项指标变化实验期间，两组动物ABRⅡ波阈值比较没有统计学差异（P0.05）。造模前实验组大鼠和对照组大鼠比较Ⅰ波、Ⅲ波、Ⅴ波的潜伏期和Ⅰ-Ⅲ、Ⅲ-Ⅴ、Ⅰ-Ⅴ波间期均没有明显差异（P0.05）；造模后4周实验组大鼠和对照组大鼠比较Ⅰ波、Ⅲ波、Ⅴ波的潜伏期和Ⅰ-Ⅲ、Ⅲ-Ⅴ、Ⅰ-Ⅴ波间期仍没有明显差异（P㧐0.05）；造模后8周、12周、16周、20周时实验组大鼠和对照组大鼠比较Ⅲ波、Ⅴ波潜伏期和Ⅰ-Ⅲ、Ⅰ-Ⅴ波间期有统计学差异（P㩳0.05），Ⅰ波潜伏期和Ⅲ-Ⅴ波间期没有统计学差异（P㧐0.05）。 5耳蜗石蜡切片HE染色实验组大鼠耳蜗组织血管纹中管腔样结构与对照组耳蜗组织血管纹比较减少：实验组与对照组大鼠耳蜗螺旋韧带中和螺旋神经节细胞数量比较有统计学差异（P㩳0.05），实验组大鼠耳蜗螺旋韧带中和螺旋神经节细胞数量少于对照组。 6耳蜗中Cx26、Cx30表达变化造模后4周实验组和对照组耳蜗内基底膜、血管纹和螺旋韧带中Cx26、Cx30荧光表达强度无统计学差异（P㧐0.05）；造模后8周、12周、16周、20周实验组和对照组耳蜗内基底膜、血管纹和螺旋韧带中Cx26、Cx30荧光表达强度有统计学差异（P㩳0.05），且实验组耳蜗内基底膜、血管纹和螺旋韧带中Cx26、Cx30荧光表达强度弱于对照组。结论： 1通过高糖高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素腹腔注射可以成功制备2型糖尿病大鼠模型，并可作为研究2型糖尿病听力损伤的动物模型。 22型糖尿病大鼠早期即存在听力损害，ABR可以作为其听力下降早期诊断的客观评价标准。 32型糖尿病大鼠听力损害出现时间与耳蜗中Cx26、Cx30表达出现变化时间一致，2型糖尿病大鼠听力损害可能与Cx26、Cx30有关。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R764

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