【摘要】：目的 1.检测泪腺腺样囊性癌(ACC)组织中胶质源性神经营养因子(GDNF), GDNF家族受体α1(GFRα-1)、酪氨酸激酶受体(Ret)和神经细胞粘附因子(NCAM)以及凋亡抑制蛋白(Survivin)的表达,并观察其与泪腺ACC组织嗜神经侵袭(PNI)等生物学行为之间的关系,以及彼此之间的相关性。 2.研究GDNF对体外培养人腺样囊性癌细胞(ACC-2)增殖和迁移的影响,为进一步明确GDNF在泪腺腺样囊性癌PNI机制提供实验依据。 3.分别探讨人腺样囊性癌细胞(ACC-2)中GDNF、GFRα-1、NCAM、Survivin蛋白质和]mRNA表达的相关性,进一步了解它们在泪腺ACC PNI微环境中的相互作用与关系,为临床寻找控制早期PNI的有效靶点提供参考依据。 方法 1.免疫组织化学SABC法检测51例泪腺ACC患者手术标本和5例正常泪腺组织中GDNF、GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表达状况。 2.通过MTT法、绘制细胞生长曲线,以及流式细胞术检测不同浓度(时间)的GDNF对人腺样囊性癌细胞(ACC-2)增殖和凋亡的影响；Transwell小室法研究不同浓度(时间)的GDNF对人腺样囊性癌细胞(ACC-2)迁移能力的影响。 3.分别通过(?)Vestern Blotting蛋白印迹法和RT-PCR法检测一定浓度的GDNF对人腺样囊性癌细胞(ACC-2)中GDNF、GFRα-1、NCAM以及Survivin蛋白质和]nRNA表达的影响。 结果 1.泪腺ACC组织中GDNF、GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表达率依次为62.7%(32/51)、62.7%(32/51)、54.9%(28/51)、60.8%(31/51)、60.8%(31/51),显著高于泪腺正常组织；实体型ACC、复发组ACC的嗜神经侵袭率显著高于腺样-管状型ACC、原发组ACC的嗜神经侵袭率,差别具有统计学意义(P0.05),有/无疼痛组ACC间嗜神经侵袭率的差异无统计学意义(P0.05)。 2.实体型ACC组织中NCAM、Survivin的表达率显著高于其在腺样-管状型ACC组织中的表达率,复发组ACC组织中GFRα-1、Ret、NCAM以及Survivin的表达率显著高于其在原发组ACC组织中的表达率,有嗜神经侵袭组ACC中GDNF GFRα-1、Ret、NCAM的表达率显著高于其在无嗜神经侵袭组ACC中的表达率,上述差别均具有统计学意义(P0.05)。 3.泪腺ACC组织中GDNF的阳性表达与GFRα-1、Ret、NCAM的阳性表达均具有明显相关性,GDNF的阳性表达与Survivin的阳性表达无明显相关性。 4.标准培养48h,GDNF浓度在20～120ng/ml之间,可促进ACC-2细胞系的增殖,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05),其中,80ng/ml的GDNF促进ACC-2增殖作用最明显。在第72h,80ng/ml GDNF促进ACC-2细胞系的增殖作用最显著(P0.05)。上述结果与80ng/ml GDNF作用下的ACC-2细胞生长曲线的趋势一致。 5.标准培养48h后,应用流式细胞仪检测,80ng/ml GDNF干预组ACC-2细胞中的G1期ACC-2细胞比例较对照组减少,S期ACC-2细胞比例较对照组增加。 6.标准培养40h, GDNF在60～160ng/ml浓度下促进ACC-2细胞迁移(P0.05),其中,160ng/ml的GDNF促进ACC-2迁移作用最强。从第24h起,100ng/ml GDNF在各时间点(24h,30h,40h)均可明显促进ACC-2细胞系迁移,与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。 7.80ng/ml GDNF能够一致性上调ACC-2细胞的GFRα-1、NCAM、Survivin蛋白质和(?)m RNA的表达,下调了ACC-2细胞中GDNF m RNA和蛋白质的表达。 结论 1.泪腺ACC具有嗜神经侵袭性生物学行为,嗜神经侵袭现象可作为泪腺ACC预后不良的临床观察指标之一。 2. GDNF、GFRα-1、Ret在泪腺ACC嗜神经侵袭中发挥重要作用,三者可以作为判断有无嗜神经侵袭现象的生物学指标,而后两者有望成为预测及评估预后的因素之一。 3. GDNF可以促进体外培养的人ACC-2细胞的增殖和迁移能力,并且分别具有剂量和时间依赖性,但是GDNF对ACC-2细胞的凋亡水平无明显的调控作用。 4. GDNF通过GFRα-1-Ret信号传导途径,或者通过NCAM这一非依赖Ret的信号途径,沿着以周围神经为中心的GDNF的浓度梯度,以及凭借NCAM的异/同嗜性粘附作用,使得泪腺ACC组织与周围神经相互吸引,形成了有利于肿瘤嗜神经侵袭的微环境,增强了泪腺ACC肿瘤细胞的神经侵袭能力。 5. NCAM的高表达与泪腺ACC的病理类型相关,同时成为判断泪腺ACC嗜神经侵袭行为与预后的指标,通过检测NCAM在泪腺ACC肿瘤细胞周围的表达,特别是在肿瘤周围神经中的表达,了解泪腺ACC嗜神经侵袭的情况,可能发现肿瘤细胞的残留或早期的神经侵犯,以期指导临床治疗。 6. Survivin的表达与泪腺ACC的病理类型、预后密切相关,却与泪腺ACC的嗜神经侵袭现象无明显的相关性；Survivin与GDNF可能具有促进ACC-2细胞增殖的协同作用。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R739.7
【参考文献】
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1 祝为桥,纪祥瑞,周福亭,李宁毅;涎腺腺样囊性癌组织中神经生长因子及其受体的表达[J];现代口腔医学杂志;2003年02期
2 唐峰,王虹,赵为之,李薇,李琼,庄丽;53例涎腺腺样囊性癌MMP-2和MMP-9表达与神经浸润和淋巴结转移的关系[J];复旦学报(医学科学版);2001年02期
3 孙沫逸,王磊,杨连甲,侯锐,孙文斌,卢超;NGF在涎腺腺样囊性癌中的表达及与嗜神经侵袭和疼痛的关系[J];第四军医大学学报;2004年11期
4 孙长伏,李瑞武,钟鸣,王兆元,王玉新;涎腺腺样囊性癌嗜神经性的相关临床病理学研究[J];中国医科大学学报;1999年05期
5 罗小龙,孙沫逸,吕春堂,周中华;髓磷脂碱性蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达[J];口腔颌面外科杂志;2005年03期
6 孙沫逸,王磊,陆斌,杨耀武,李建虎,程晓兵;酪氨酸激酶C与涎腺腺样囊性癌嗜颅神经侵袭的关系[J];中华神经外科疾病研究杂志;2004年04期
7 王磊,孙沫逸,杨耀武,程晓兵,李建虎;酪氨酸激酶A在涎腺腺样囊性癌中的表达及与嗜神经侵袭的关系[J];中国美容医学;2004年02期
8 罗小龙,孙沫逸,杨连甲,李春智,孙文斌;雪旺细胞标志物S100蛋白在涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭中的意义[J];实用口腔医学杂志;2003年02期
9 王磊,孙沫逸,杨耀武,程晓兵,侯锐,卢超;神经营养因子-3在涎腺腺样囊性癌中的表达及其意义[J];实用口腔医学杂志;2004年03期
10 毛立民!100081现在哈尔滨医科大学第一临床医学院口腔外科,150001,于世凤!100081,孙开华!100081,刘红岩,赵万州,韩锐;金属蛋白酶抑制剂BB-94抑制腺样囊性癌侵袭转移的实验[J];中华口腔医学杂志;2001年04期
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