促红细胞生成素联合复明饮治疗视网膜缺血再灌注损伤的临床观察

发布时间：2019-03-13 08:33

【摘要】：目的建立和人体视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)疾病类似的动物模型,对动物给予促红细胞生成素(rhEPO)联合复明饮治疗,并分析该药物对RIRI的作用机制,为临床上诊治RIRI奠定实验学基础。同时在临床实践中以促红细胞生成素联合复明饮治疗视网膜缺血病人,研究其临床疗效。方法1.以82只未感染任何疾病的纯种雄性大耳白兔为实验对象,将其进行随机分为3组,正常组、损伤组、治疗组各10只、36只、36只;损伤组与治疗组两组依照其不同灌注时间,各分为损伤后1/4d、1/2d、1d、2d、4d、8d组,共6组,每组大耳兔各6只。2.全部大耳兔均对右眼行建模治疗,除正常组10只大耳兔不建模外,利用前房灌注增加眼内压途径,建模为人视网膜缺血再灌注损伤模型。对正常组动物从耳缘部位静注0.9%NaCl,剂量为2.0ml/kg,一日一次;损伤组在建模后,从耳缘部位静注0.9%NaCl,剂量同正常组;治疗组在建模后,用灌胃针对小鼠进行注复明饮灌胃,大耳兔缺血后5min向其耳缘部位注射rhEPO(1000U/k)。3.损伤后1/4d、1/2d、1d、2d、4d、8d,从耳缘部位静注10毫升02处死,死后即刻取其眼球部位,进行包埋切片。4.运用HE染色法,观察分析各个时间段动物视网膜的结构改变情况;通过免疫组化法分析视网膜细胞Bcl-2、Bax水平;通过TUNEL法观察视网膜内神经细胞的变化;运用荧光金逆行示踪方法评价RGCs生存率。对全部实验数据进行统计学分析,统计学软件采用SPSS18.0进行处理。临床研究以哈尔滨二四二医院眼科被诊断为视网膜中央动脉阻塞的60名病人为研究对象,对照组为常规治疗方式,研究组基于常规治疗,采取复明饮联合促红细胞生成素治疗方式。研究组、对照组各30例患者,需要治疗的眼睛只数分别为36只、35只,对患者进行实力改善进行检查。结果1.HE染色:(1)神经节细胞数量,损伤组相比正常组偏低。损伤组中,损伤后1/4d视网膜出现轻度水肿情况,且随着损伤时间的延长,水肿情况更为严重,组织细胞间隙加大,体积增大,液泡明显;水肿1d后,水肿情况最严重,随后2d～4d,水肿程度逐渐降低,细胞间隙逐渐缩小;8d后水肿现象褪去,细胞间隙恢复正常。(2)治疗组:神经节细胞数量偏低、细胞间隙较损伤组更小,视网膜水肿情况较损伤组对比更轻微。2.免疫组化分析:(1)正常组:凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白为阴性。(2)损伤组:损伤后1/4d,视网膜中少数Bcl-2、Bax蛋白为阳性,多在神经节细胞间隙;随损伤时间的增加,Bcl-2、Bax蛋白阳性表达情况更为明显,1d后阳性表达数量最多,内核层有少量呈阳性,外核层全为阴性;2d～4d阳性表达数量减低,多数在神经节细胞间隙进行表达;损伤后8d,全部表达呈阴性。(3)治疗组:Bcl-2、Bax表达情况和损伤组类似。对比损伤后1/4d、1/2d、1d、2d、4d、8d各时段,Bcl-2表达水平,除8d外,治疗组相比损伤组明显偏高。Bax水平,治疗组相比损伤组明显偏低(P0.05)。3.TUNEL法分析结果:(1)正常组:神经细胞未见凋亡情况。(2)损伤组:损伤后1/4d,少数神经细胞可见凋亡情况,随着时间的延长,凋亡情况逐渐严重,阳性数量增加,损伤1d后,阳性表达率升至最高,2d后呈降低趋势,3d后显著下降,5d后阳性表达全部消失。(3)治疗组:神经细胞凋亡情况和损伤组类似,但凋亡细胞的阳性表达率,与损伤组对比明显偏低。损伤组与治疗组,损伤后1/4d、1/2d、1d、2d、4d时间段,细胞凋亡情况对比有明显差别(P0.01);5d后,细胞凋亡情况对比无显著性差异(P0.05)。4.RGCs存活率:(1)正常组RGCs存活率:各时段分别为63%、66%等。(2)损伤组RGCs存活率:各时段分别为82%、83%等。(3)治疗组RGCs存活率:各时段分别为95%、94%等。三组之间对比,均呈显著性差异(P0.05)。临床实验,两组治疗前后视野检测比较:研究组在治疗后的平均光敏度增加水平显著高于对照组,两组对比具显著性差异(P0.05);研究组治疗后平均缺损改善程度明显高于对照组,对比具显著性差异(P0.05)。两组间治疗前眼压无差异性,治疗后眼压及治疗前后眼压差值均有差异(P0.05)。两组间治疗前b波幅度无差异性,治疗后b波幅度及治疗前后b波幅度差值均有差异(P0.05)。治疗后,研究组总有效率86.7%;对照组总有效率66.7%,明显小于研究组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 rhEPO联合复明饮对视网膜缺血再灌注损伤治疗有明显的临床疗效,可帮助维持视网膜的正常形态结构;复明饮对视网膜神经细胞凋亡情况有明显的抑制作用,主要原因是和Bcl-2、Bax蛋白表达水平有关。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R774.1

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本文编号：2439234