阿帕替尼联合顺铂治疗鼻咽癌的体内实验研究

发布时间：2019-05-21 15:53

【摘要】：目的:(1)靶向新药阿帕替尼(Apatinib,YN968D1)是否对CNE-2裸鼠鼻咽癌移植瘤模型具有抗肿瘤的作用;(2)阿帕替尼与化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)联合使用治疗CNE-2裸鼠鼻咽癌移植瘤模型是否具有协同作用,并探讨阿帕替尼与顺铂联合使用的最佳给药顺序从而产生最大的疗效。方法:132只裸鼠建立CNE-2鼻咽癌移植瘤模型后,随机分为A部分:分6组,每组18只,分为空白对照组(NS 0.1ml/d ip d1-7)、单独阿帕替尼组(Apatinib 200mg/kg/d ip d1-7)、单独顺铂组(DDP 5mg/kg/d ig d1)、先阿帕替尼后顺铂组(Apatinib 200mg/kg/d ip d1-7+DDP 5mg/kg/d ig d8)、先顺铂后阿帕替尼组(DDP 5mg/kg/d ig d1+Apatinib 200mg/kg/d ip d2-8)、同时用药组(DDP 5mg/kg/d ig d1+Apatinib 200mg/kg/d ip d1-7)。治疗结束后第二天,采用颈椎脱臼法每组处死6只裸鼠,瘤体称重,比较抑瘤率,并计算两药联合效应Q值,瘤体行免疫组化VEGFR-2抗体染色肿瘤组织检测检测肿瘤细胞VEGFR2(血管内皮生长因子受体2)的表达量,免疫组化CD31抗体染色肿瘤组织检测肿瘤血管密度,行tunel检测测肿瘤组织细胞凋亡的数量。每组另取6只裸鼠行小动物18F-FDG PET-CT检测通过观察图像及T/M值检测肿瘤组织代谢情况。每组剩余6只裸鼠观察生存期,并绘制肿瘤生长曲线图。B部分共24只荷瘤裸鼠,随机分为4组,每组6只,分为D0组(不治疗组)、D5组(Apatinib 200mg/kg/d ip d1-4,第5天处死裸鼠)、d10组(apatinib200mg/kg/dipd1-7,第10天处死裸鼠)、d15组(apatinib200mg/kg/dipd1-7,第15天处死裸鼠),处死裸鼠剥离肿瘤后,瘤体行免疫组化vegfr-2抗体染色肿瘤组织检测检测肿瘤细胞vegfr2(血管内皮生长因子受体2)的表达量,从而动态观察在治疗过程中及治疗后肿瘤细胞的vegfr-2的表达量的变化。结果:a部分荷瘤裸鼠空白对照组肿瘤生长最快,各治疗组的肿瘤体积及质量的平均值较空白对照组低,差异均具有统计学意义(p0.05);其中以阿帕替尼联合顺铂同时用药组的肿瘤体积及质量最低,差异较其他各治疗组具有统计学意义(p0.05)。各治疗组裸鼠的抑瘤率分别为:单独阿帕替尼组15%,单独顺铂组31%,先阿帕替尼组46%,先顺铂组53%,阿帕替尼联合顺铂同时用药组70%。阿帕替尼联合顺铂同时用药组两药联合效应q值为1.69,说明两药连用产生协同作用。而先阿帕替尼组及先顺铂组两组的q值均小于1.5,说明两药连用仅产生了叠加作用。单用阿帕替尼组的裸鼠平均生存时间为60天,明显高于空白对照组(41天),差异具有统计学意义(p0.05)。单独顺铂组的平均生存时间为67天,较单独顺铂组差异没有统计学意义。所有联合用药组中其中以阿帕替尼联合顺铂同时用药组裸鼠平均生存时间最长,达88天,较其他各组差异具有统计学意义(p0.05)。行免疫组化检测示使用阿帕替尼治疗后的裸鼠vegfr-2的表达、血管密度均明显低于空白对照组及单用顺铂组,差异具有统计学意义(p0.05);而其中以阿帕替尼联合顺铂同时给药组vegfr2的表达量及血管密度均最低,差异具有统计学意义(p0.05)。行tunel检测肿瘤组织细胞凋亡可见空白对照组细胞凋亡数量很少,平均每个视野的凋亡细胞数约为3个左右。而单独阿帕替尼组的凋亡数量约为12个左右,单独顺铂组的细胞凋亡数量约为15个左右,两者之间的差异无统计学意义(p0.05),但这两组的细胞凋亡数量较空白对照组明显升高,差异具有统计学意义(p0.05)。三组联合用药组的细胞凋亡数量明显高于空白对照组及单独用药组,差异具有统计学意义(p0.05),在这三组当中,又以阿帕替尼联合顺铂同时用药的细胞凋亡数量最高,达34.67个,较先阿帕替尼组及先顺铂组差异具有统计学意义。行小动物18f-fdgpet-ct检测检测肿瘤组织代谢情况发现空白对照组的肿瘤最大,肿瘤代谢最强,整个肿瘤几乎均呈高代谢信号,t/m值也最高,平均达2.3左右。单独使用阿帕替尼及单独使用顺铂的肿瘤代谢信号略低于空白对照组,t/m值几乎均为1.9左右,较空白对照差异具有统计学意义(p0.05),说明经过阿帕替尼或者顺铂治疗后降低了肿瘤的代谢;而单独阿帕替尼组及单独顺铂组之间的差异无统计学意义(p0.05)。在三组联合用药组中,阿帕替尼联合顺铂同时用药组肿瘤代谢信号最低,t/m值约为1.2左右,差异较先阿帕替尼组及先顺铂组具有统计学意义(p0.05),说明阿帕替尼联合顺铂同时用药组明显降低了肿瘤的代谢。b部分荷瘤裸鼠行免疫组化检测vegfr-2的表达,发现d0组及d15组肿瘤组织vegfr-2呈高表达,d0组vegfr-2的表达量高达85.83%,d15组vegfr-2的表达量高达75.50%,差异没有统计学意义(p0.05)。d5组vegfr-2的表达量为61.67%,d10组的表达量为64.33%,两者之间差异没有统计学意义(p0.05)。但d5,d10组较d0组差异具有统计学意义(p0.05),这两组较d15组差异没有统计学意义(p0.05)。结论:1、阿帕替尼对cne-2裸鼠鼻咽癌移植瘤模型具有抗肿瘤作用,能抑制肿瘤生长、降低肿瘤代谢及延长生存时间;阿帕替尼对鼻咽癌的抗肿瘤作用,主要是通过减少VEGFR2的有效表达量从而抑制VEGF-VEGFR血管通路信号从而抑制血管生成抑制肿瘤生长实现的。2、阿帕替尼联合顺铂作用于CNE-2裸鼠鼻咽癌移植瘤模型具有抗肿瘤作用的协同效应,其中以阿帕替尼联合顺铂同时用药组抗肿瘤作用最佳,能明显抑制肿瘤生长、降低肿瘤代谢及延长生存时间。3、VEGFR-2可成为阿帕替尼治疗鼻咽癌预测疗效的一个标志物。
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【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.63

【参考文献】