LMP1-CTAR3在鼻咽癌干细胞迁移侵袭中的作用及机制

发布时间：2019-09-18 00:05

【摘要】：目的：本研究选用鼻咽癌干细胞SP18细胞为对象，观察LMP1羧基末端第三个功能活性区（CTAR3）对SP18细胞侵袭与转移的影响，，探讨LMP1-CTAR3影响SP18细胞迁移与侵袭的分子机制。 方法：通过脂质体转染建立稳定表达LMP1及其突变体LMP1△252-351的SP18细胞系SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351；采用MTT法、平皿克隆形成实验检测细胞增殖情况；选用划痕实验、transwell实验检测细胞迁移与侵袭情况；利用基因芯片检测SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351间的差异表达基因，使用生物信息学初步分析相关差异表达基因的功能。 结果： 1.LMP1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18增殖、迁移与侵袭的影响 MTT生长曲线、平皿克隆结果显示，SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△252-351细胞生长速度及克隆形成力明显高于SP18细胞(空白对照)和SP18-LNSX细胞（载体对照）（P0.05），SP18-LMP1细胞生长速度及克隆形成力高于SP18-LMP1△252-351细胞（P0.05）。结果提示CTAR3在LMP1促进SP18细胞增殖的过程中可能发挥一定的作用。 划痕实验、Transwell实验结果显示，SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△252-351细胞的迁移侵袭能力较SP18细胞和SP18-PLNSX细胞增强（P0.05），SP18-LMP1△252-351细胞较SP18-LMP1细胞降低（P0.05）。上述结果说明LMP1具有促进SP18细胞迁移侵袭的能力，其中CTAR3可能发挥重要的作用。 2.LMP1-CTAR3影响细胞迁移与侵袭的差异基因筛选 采用Agilent4×44K人类全基因组表达谱芯片检测，筛选出差异表达基因314个，其中上调基因180个，下调基因134个。将314个差异表达基因涉及的生物学功能进行“FunctionalAnnotationClustering”分析，结果显示差异表达基因涉及的生物学功能分类聚成24个集合，选取EnrichmentScore分数最高的3个功能集合，主要参与细胞凋亡、迁移运动相关的生物学过程。提示LMP1-CTAR3极大可能与SP18细胞的迁移密切相关。 采用DAVID在线分析软件，对差异表达基因进行GeneOntology分类后，共筛选出18个与迁移及侵袭相关的差异表达基因，其中13个上调基因，5个下调基因。 综合信号通路、基因生物学分类、基因间相互作用分析，本研究筛选出EFNB2、THBS1、FN1、MMP14等LMP1-CTAR3促进鼻咽癌迁移侵袭的相关差异表达基因，它们可能通过促进细胞黏附、细胞运动，降解细胞外基质及基底膜，促进肿瘤血管生成，从而在鼻咽癌的迁移侵袭中发挥作用。 结论： 1、CTAR3是LMP1促进鼻咽癌干细胞SP18迁移侵袭的重要功能活性区。 2、LMP1可能通过调节EFNB2、THBS1、FN1、MMP14等表达促进鼻咽癌的迁移侵袭。
【图文】：

结 果建 立 稳 定 表 达 L M P 1 及 其 突 变 体 L MP 1△25 2 -3 5 1 的 SP 1 8 细 胞 系将 空 白 质 粒 、 PL N S X - LM P1 和 PL N S X- LM P1 △2 5 2- 3 51 分 别 转 染 到 鼻 咽 癌 干 8， 用 G4 18 筛 选 1 -2 周 后， 可获 得 稳定 克 隆 （ 图 1） 。将 细 胞分 SP 1 8 细 胞 照 ）、 S P 1 8- LN S X 细 胞（ 载 体对 照 ）、 S P 1 8 - LM P1 细 胞 和 SP 1 8 - LM P1 △2 52 -3 免 疫 细 胞 化 学 结 果 （ 图 2 ） 显 示 ， SP 1 8 细 胞 和 SP 1 8 - LN S X 细 胞 LM P1 表 SP 1 8 - LM P1 细 胞 和 SP 1 8- LM P1 △2 52 -3 51 细 胞 LM P1 表 达 阳 性 ； 分 别 抽 提 细A ，R T - PC R 琼 脂糖 凝 胶电 泳 结果 （ 图 3 ）显 示 ，S P 1 8 细 胞和 SP 1 8 - LN S X 细形 成 ，而 SP 1 8 - LM P1 细胞 和 SP 1 8 - LM P1 △2 5 2- 3 51 细胞 均在 57 5 b p 处有 条 带形 稳 定 表达 LM P1 及 其突 变 体 LM P1 △2 52 -3 51 的 SP 1 8 细 胞系 建 立 成功 。

2 免 疫细 胞化 学 染色 检测 LM P1 及 LM P1 △2 5 2- 3 51 在 SP 1 8 细 胞中 的 表 达（ ×4 0 ： S P 1 8 细胞 ， B ：S P 1 8 -L N S X 细 胞， C ：S P 1 8 -L M P1 细胞 ，D ： SP 1 8 -L M P1 △2 5 2- 3 5 1细胞 图 3 RT - PC R 检 测 SP 1 8 细 胞中 LM P1 及 LM P1 △2 52 -3 51 的 表达 ma r k e r2 00 0， 1： SP 1 8 细 胞， 2 ：SP 1 8 -L N S X 细胞 ，3 ：SP 1 8 -L M P1 细胞 ， 4 ：SP 1 8 -L M P1 △2 5 2- 3细胞 M 1 2 3 420 0 0 10 0 0 75 0 50 0 25 0 10 0 57 5
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R739.63

【参考文献】

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本文编号：2537163