Hep2-exo负载树突细胞诱导抗喉癌免疫效应的机制

发布时间：2019-10-18 16:30

【摘要】：目的探讨人喉癌细胞Hep2细胞来源外泌体(Hep2-exo)负载树突细胞(DC)后体外刺激细胞毒T细胞对Hep2细胞的杀伤作用。方法利用蔗糖密度梯度超速离心法从Hep2细胞培养上清液中分离Hep2-exo。透射电子显微镜鉴定Hep2-exo形态,Western印迹分析Hep2-exo表面CD9分子表达。分离培养喉癌患者外周血单个核细胞诱导的DC,流式细胞术鉴定细胞表型。用MTT法检测负载Hep2-exo的DC刺激T淋巴细胞增殖情况及细胞毒T细胞对Hep2细胞的杀伤作用。结果透射电镜下见Hep2-exo呈典型的杯状,大小相对均一,平均直径30~100 nm。Hep2-exo表面有CD9CD63分子表达。单个核细胞DC有CD1a分子表达说明诱导成功,边缘有绒毛样突起,呈典型的PC形态。负载Hep2-exo的DC刺激T细胞增殖能力及T细胞对靶细胞的杀伤效应明显强于未负载Hep2-exo的DC(P0.05)。结论负载Hep2-exo的DC能促进T细胞增殖,可体外诱导细胞毒T细胞应答抑制喉癌细胞生长。
【图文】：

p2细胞分泌的Exo呈圆形或椭圆形，大小相对均一，其外可见有脂质膜包裹，内部为低电子密度物质，平均直径30～100nm，同国外文献报道〔1，2〕一致。Hep2细胞裂解物和Hep2-exo均表达CD9和CD63分子，Hep2-exo表达CD9和CD63灰度值比Hep2细胞裂解物高。见图1，图2。2.2DC表型分析来源于PBMC的CD14+经过细胞因子(rh-GM-CSF，，rhIL-4，TNF-α)诱导培养至第7天，显微镜见大部分细胞贴壁生长，出现毛刺样突起，呈现典型的树枝状突样。通过流式细胞仪分析显示DCs表面高表达CD1a分子，则证明DC诱导成功。见图3。图1Hep2细胞来源Exo电镜图(×20000)图2Western印迹结果分析·1828·中国老年学杂志2017年4月第37卷

小相对均一，其外可见有脂质膜包裹，内部为低电子密度物质，平均直径30～100nm，同国外文献报道〔1，2〕一致。Hep2细胞裂解物和Hep2-exo均表达CD9和CD63分子，Hep2-exo表达CD9和CD63灰度值比Hep2细胞裂解物高。见图1，图2。2.2DC表型分析来源于PBMC的CD14+经过细胞因子(rh-GM-CSF，rhIL-4，TNF-α)诱导培养至第7天，显微镜见大部分细胞贴壁生长，出现毛刺样突起，呈现典型的树枝状突样。通过流式细胞仪分析显示DCs表面高表达CD1a分子，则证明DC诱导成功。见图3。图1Hep2细胞来源Exo电镜图(×20000)图2Western印迹结果分析·1828·中国老年学杂志2017年4月第37卷
【作者单位】： 永州职业技术学院基础医学部;湖南科技大学生命科学学院;
【基金】：永州市2015年度第二批指导性科技计划项目(永科发[2015]10号)
【分类号】：R739.65

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本文编号：2551181