【摘要】：目的：探讨脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cell, AMSC)联合类内皮细胞(endothelial-like cell, ELC)或人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell, HUVEC)移植对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)大鼠的血-视网膜屏障(blood-retinal barrier, BRB)的影响及作用机制；评价不同剂量的AMSC移植治疗DR大鼠的效果。方法：以链脲佐菌素腹腔注射法建立Wistar大鼠糖尿病动物模型。于注射后7个月(30周)时,随机抽选大鼠行视网膜血管网消化铺片以明确DR血管性损伤的发生。原代分离、培养AMSCs和HUVECs,流式细胞仪进行鉴定。将AMSCs置于内皮细胞培养基中诱导分化得到ELCs。DR大鼠随机分组：未治疗组、诱导组(AMSCs +ELCs)、联合组(AMSCs+HUVECs)、高剂量组(AMSCs)及低剂量组(AMSCs),经尾静脉注射行细胞干预。于干预后2、4周,Evans blue渗漏实验评估大鼠的BRB功能；HE染色评估大鼠视网膜水肿度；qPCR及Western-blot检测大鼠视网膜细胞间黏附分子-1 (intercellular cell adhesion molecule-1, ICAM-1)血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、促血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)的表达；免疫组织化学及共聚焦荧光染色观察移植细胞向视网膜的归巢；心、肝、脾、胰、肾的HE及免疫组织化学染色评估细胞移植的安全性。结果：1)DR模型：7个月时,糖尿病大鼠的视网膜血管网消化铺片可见闭锁的无细胞性毛细血管,DR大鼠模型建成。2)细胞培养：原代培养的AMSCs及诱导而来的ELCs均为成纤维细胞样。原代培养的HUVECs为铺路石样排列的多角形细胞,高表达内皮细胞标志分子CD31(99.52%)和vWF(99.63%)。3) BRB功能试验：干预后2周,与未治疗组相较,仅诱导组及低剂量组的Evans blue渗漏量有所减轻,BRB功能有改善。干预后4周,其余各干预组的BRB功能均较诱导组的为好。3) 分子表达：干预后2周,与未治疗组相较,仅低剂量组的ICAM-1蛋白水平有所下降；诱导组的ICAM-1及VEGF的基因转录转录及蛋白表达均有所上升；各组之间Ang-2的基因转录及蛋白表达均无统计学差异。干预后4周,与未治疗组相较,各干预组的ICAM-1蛋白表达均有所下降；低剂量组的VEGF的基因转录水平有所上升,但VEGF蛋白表达有所下降；诱导组的VEGF的基因转录水平有所上升,蛋白水平无明显变化；各组之间Ang-2的基因转录及蛋白表达水平均无统计学差异。4)视网膜结构：标化灰度值分析结果示,干预后2周,与未治疗组视网膜对应层次对比,仅低剂量组的外核层和视网膜神经纤维层水肿度有所减轻。干预后4周,与未治疗组视网膜对应层次相较,各干预组的外核层、除外诱导组的各干预组的内核层、联合组及高剂量组的内丛状层的水肿度均有所减轻。5)细胞归巢：免疫组织化学染色及共聚焦结果示,人源细胞在视网膜上散在分布,可能与视网膜血管有密切关系。6)移植安全性：HE染色镜下可见糖尿病肾病改变及肾脏多发肿瘤。仅联合组可以见到大量肾小管细胞管型。胰腺的胰岛细胞数目有所减少。心、肝、脾的结构大致正常。免疫组化结果示人源细胞密集于大鼠的脾脏和肾脏肿瘤周围,可见于肝脏汇管区,偶见于肾小管管壁和联合组的肾小管管腔。结论：AMSCs能够改善DR大鼠的BRB功能,该作用可能是通过抗炎作用来实现。单纯低剂量AMSCs治疗组能够更快改善DR大鼠的BRB功能。单纯AMSCs注射治疗DR的效果优于联合ELCs组。
【图文】：
图１－２－４－１：视网膜流水冲洗过夜图逦１－２－４－２：消化后铺展开的视网膜血管网逡逑（左上小图中红色箭头示大鼠视网膜）逡逑
图１－３－３－１：视网膜血管网铺片肥染色（１００Ｘ）左，，大血管旁毛细血管网（蓝色箭头示闭锁的逡逑毛细血管，植色箭头示周细胞）；中，中等血管旁的毛细血管网（蓝色箭头示闭锁的毛细血管，逡逑红色箭头示毛细血管间桥）；右，终末毛细血管网（蓝色箭头示闭锁的毛细血管，红色箭头示逡逑扩张的无细胞毛细血管）。注：由于毛细血管管壁乏光滑感，很难认定影周细胞（文献中提及逡逑的影周细胞为微突出于毛细血管管壁无细胞核的周细胞），故图中不再标出。逡逑１．邋４讨论逡逑１．４．１糖尿病建模方法的选择逡逑临床上糖尿病分为：Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病和其它特异性糖尿病［｜２］。Ｉ型糖逡逑尿病的基本病变为膜岛Ｐ细胞破坏所致的膜岛素绝对性缺乏。ＩＩ型糖尿病的基本病逡逑变为膀岛素抵抗合并族岛素分泌不足。其它特异性糖尿病包括：Ｐ细胞功能的基因逡逑缺陷、族岛素作用的基因缺陷、感染、药物或化学制剂所致的糖尿病等。逡逑
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R774.1
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 陈同度,张昌颖;素食大鼠的贫血现象[J];营养学报;1957年04期
2 陈伟强;赵善广;;自制注射用大鼠固定装置[J];上海实验动物科学;1992年04期
3 肖柳英,林培英,冯昭明,张丹;不同周龄的SD大鼠生理、生化及体重的正常值测定[J];中药新药与临床药理;1996年03期
4 李淑云;简易大鼠灌胃器的制作[J];锦州医学院学报;2001年04期
5 杨明智,陈积圣;一种大鼠抓取与固定的新工具介绍[J];上海实验动物科学;2001年03期
6 戴英,陆群;复方H_(505)对Wistar大鼠外周血的血液流变学指标的影响[J];中国血液流变学杂志;2001年01期
7 韦应波,孙喜庆,曹新生,姚永杰,冯岱雅,杨长斌;+Gz暴露时间对大鼠记忆功能和行为的影响[J];航天医学与医学工程;2003年01期
8 吕学军,郭俊生,李敏,周利梅,张永娟;晕船大鼠体内铁含量的变化[J];中国职业医学;2003年04期
9 汤仁仙,王迎伟,王慧,周峰;201A中药合剂对大鼠抗肾小球基底膜肾炎病变的影响[J];徐州医学院学报;2003年06期
10 孙同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陈伟;介绍一种简易的大鼠保定方法[J];上海实验动物科学;2004年01期
相关会议论文 前10条
1 尹音;孙振宇;胡敏;李冬霞;;持续性高正加速度对大鼠颞颌关节损伤的作用[A];第八届全国颞下颌关节病学及（牙合）学大会论文汇编[C];2011年
2 祝~=骧;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;
本文编号：2566200
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/wuguanyixuelunwen/2566200.html
