钙激活氯通道在不同鼠龄豚鼠耳蜗血管纹的表达变化

发布时间：2020-01-18 15:24

【摘要】：目的:研究2周(2 weeks,2 w)、3月(3 months,3 m)、1年(1 year,1 y)和D-半乳糖(D-galactose,D-gal)衰老模型组豚鼠耳蜗血管纹中,钙激活氯通道(gcalcium-activated chloride channels,CaCCs)的组成蛋白-跨膜蛋白A(transmem-brane protein 16A,TMEM16A)和跨膜蛋白B(transmem-brane protein 16B,TMEM16B)的表达,以及其表达量与年龄性听力改变的相互关系,探讨这两种通道蛋白在老年性耳聋发生发展中可能发挥的作用。方法:D-gal颈背部皮下注射制备衰老模型,并利用Morris水迷宫及SOD活性、MDA含量检测来验证衰老模型。然后通过听性脑干反应(ABR)检测不同年龄组别豚鼠的听力水平变化;利用免疫荧光技术标记豚鼠耳蜗血管纹上的TMEM16A和TMEM16B,研究不同年龄组豚鼠TMEM16A及TMEM16B在血管纹的时空表达;通过QRT-PCR以及Westen blot技术检测血管纹TMEM16A及TMEM16B在蛋白和mRNA水平的表达变化;分析它们与年龄相关性听力损失之间可能存在的关系。结果:(1)衰老模型制备完成后发现,D-gal组豚鼠进食及自主活动均减少,毛色枯槁无光泽,掉毛严重;Morris水迷宫行为测试发现实验组豚鼠较年轻豚鼠逃避潜伏期延长,而穿越平台次数少(P0.01,n=10);生化指标检测发现实验组豚鼠SOD活性升高,MDA含量降低(P0.01,n=10);ABR阈值实验组明显高于年轻豚鼠(P0.01,n=10)。(2)ABR检测结果显示,其阈值虽呈年龄相关性升高,但只有D-gal和3 m组之间具有统计学差异(P0.01,n=10)。(3)免疫荧光结果显示不同年龄组别的豚鼠耳蜗血管纹均有TMEM16A及TMEM16B表达,且其荧光强度随年龄增长逐渐增强,但D-gal组强度减弱。(4)QRT-PCR结果显示各年龄组别豚鼠耳蜗血管纹中TMEM16A及TMEM16B mRNA的表达水平随年龄而改变。其表达水平随鼠龄增加呈递增趋势,但D-gal组明显降低。D-gal组与其他各组(除2 w外)之间比较均有统计学意义(P0.05,n=6)。(5)Westen blot技术发现TMEM16A及TMEM16B在各年龄组别豚鼠耳蜗血管纹蛋白水平表达量有差异。出生后其表达水平随鼠龄增加而上调,但D-gal组时明显下降。D-gal组与其他各组(除2 w外)之间比较均有统计学意义(P0.05,n=6)。结论:豚鼠耳蜗血管纹TMEM16A和TMEM16B的表达量随豚鼠的衰老明显下降,可能与年龄相关性听力减退有一定的相关性。
【图文】：

轨迹图,豚鼠,Morris水迷宫,钙激活

钙激活氯通道在不同鼠龄豚鼠耳蜗血管纹的表达变化实验结果（Results）鼠一般状态观察gal 组豚鼠自造模起到 3 w 时即出现精神萎靡，进食减少，皮肤松弛，行动迟动减少等现象。造模成功后（4 w），D-gal 组豚鼠毛色枯槁无光泽，，且脱毛严组及 NS 组外观及一般状态几乎同实验前。orris 水迷宫行为测试实验

豚鼠,Morris水迷宫,中行,半乳糖

钙激活氯通道在不同鼠龄豚鼠耳蜗血管纹的表达变化明显落后于其他两组（如图 1c）。经统计，经过 4 d 寻找平台训练，3 组豚鼠的逃避伏期均逐渐下降，3 组间进行比较，第 1 d 3 组间无显著差异（58.69±5.56, 57.58±9.43.34±6.96 s），第 2 d 到第 4 d，D-gal 组的逃避潜伏期均高于 control 组和 NS 组（见图），且从第 3 d 开始有统计学意义（P<0.05）。而第 5 d 去除隐藏平台后，3 组豚鼠穿平台的次数也具有统计学意义（6.40±3.78, 6.60±2.19, 3.17±1.33 次）（见图 2b）。结果表明，gal 组豚鼠较 control 组和 NS 组豚鼠空间学习能力减弱。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R764.436

【参考文献】