阻塞型睑板腺功能障碍患者睑板腺的形态学观察及睑酯成分分析

发布时间：2020-02-15 02:56

【摘要】：睑板腺功能障碍(meibomian gland dysfunction,MGD)是一种慢性、弥漫性睑板腺异常,通常以睑板腺终末导管的阻塞和(或)睑板腺分泌物质或量的改变为特征,是临床最常见的眼表疾病,可引起眼红、痒、刺激感、烧灼感、干燥感,视力下降及流泪等眼部不适症状[1],但其临床症状往缺乏特异性,诊断缺乏标准性,长期以来易被临床医生所忽略及误诊。阻塞型睑板腺功能障碍(obstructive meibomian gland dysfunction,OMGD)是MGD最常见类型,以睑板腺终末导管过度角化和睑板腺开口阻塞为主,其临床表现具有多样性且缺乏有效检查手段,使得绝大数来就诊的OMGD患者为中、重度患者,治疗难度加大,治疗效果较差,治疗成本升高。睑板腺分泌物称为睑酯(meibum),以脂质为主,混杂少量眼表上皮细胞。OMGD因睑酯黏稠度增加导致睑酯成分改变,但反过来,异常睑酯代谢会加重OMGD的发生发展,因此,睑酯代谢异常与OMGD的发生、发展密切相关。脂质组学是近年来发展起来的新兴学科,通过高通量、高灵敏的现代分析技术,分析脂类及脂质代谢物的组成及代谢过程,研究技术包括脂质的提取、分离、分析鉴定以及相应的生物信息学技术解析等。本课题以睑板腺的形态学改变和睑板腺分泌物的“质”与“量”的改变两部分为主进行研究,分析OMGD患者与正常人群是否存在睑板腺的形态学改变,分析OMGD患者与正常人群是否存在睑酯成分改变及差异代谢物。目的:对OMGD患者及正常志愿者进行睑板腺形态学观察,分析两者之间是否存在差异性,对各检查参数进行相关性分析和诊断效力评估;使用OSDI问卷调查对OMGD进行分组,观察组间是否出现睑板腺的形态学改变;基于超高液相色谱-质谱(UPLC-ESI-QTOF-MS)技术建立OMGD睑板腺分泌物脂质代谢组学的分析方法,分析睑酯成分及整体轮廓,比较两组睑酯成分的差异,寻找差异代谢物,推断可能的生物标志物,从分子学水平上分析睑酯在OMGD发生、发展过程中的变化趋势。方法:1.选取2015年1月至12月在天津医科大学眼科医院门诊就诊240例(240眼)作为研究对象,其中实验组为OMGD患者,120例(120眼),对照组为正常体检的健康志愿者,120例(120眼)。依照眼表疾病指数(OSDI)问卷调查评分,将实验组分为轻度症状组、中度症状组及重度症状组,对其基本信息评估后,进行眼表、睑缘和睑板腺的形态学观察。包括:(1)眼表参数检查:眼表疾病指数(OSDI)问卷调查,症状评分、泪膜破裂时间、泪河高度评估、角膜荧光素染色、泪液分泌试验、泪膜脂质层厚度评估。(2)睑缘参数检查:睑缘评分、睑板腺开口评分及Marx线与睑板腺开口位置评分。(3)睑板腺参数检查:睑板腺分泌状态评分、睑板腺分泌物性状评分及睑板腺缺失评分,对所得数据进行统计分析,比较两组及组间是否存在统计学差异,进行相关性分析和受试曲线ROC下AUC面积计算,分析检查参数的诊断效力。2.对OMGD患者睑板腺分泌物进行提取,基于超高液相色谱-质谱(UPLC-ESI-QTOF-MS)平台和模式识别方法对其进行脂类成分轮廓分析,懫用C18色谱柱,流动相A相:0.1%甲酸10mM甲酸氨,60%乙腈40%水;流动相B相:0.1%甲酸10mM甲酸氨,10%乙腈90%IPA,梯度洗脱模式,采用ESI正、负离子高分辨、全扫描质谱分析模式,采用MarkerViewv 4.1软件对原始数据提取、峰对齐、校正和归一化处理。探索OMGD组(n=6)和正常对照组(n=6)的睑板腺分泌物成分轮廓,初步摸索两组之间的差异代谢物。结果:1.OMGD组OSDI评分、症状评分、角膜荧光染色评分、睑缘评分、睑板腺开口评分、Marx线与睑板腺开口位置评分、睑板腺分泌状态评分、睑板腺分泌物性状评分及睑板腺缺失评分高于对照组,而泪膜破裂时间、泪河高度、泪膜脂质层厚度低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),但两组的泪液分泌试验比较无显著差异。2.OMGD组与正常对照组的眼表、睑缘及睑板腺参数进行相关性分析,睑缘参数、睑板腺参数评分与OSDI评分、症状评分、角膜荧光素染色评分呈正相关性(P0.05),与泪膜破裂时间、泪河高度、泪膜脂质层厚度呈负相关性(P0.05),与泪液分泌试验无明显相关性。3.轻度症状组、中度症状组及重度症状组分别进行症状评分、泪膜破裂时间、泪河高度、角膜荧光素染色评分、泪膜脂质层厚度、睑缘评分、睑板腺开口评分、Marx线与睑板腺开口位置评分、睑板腺分泌状态评分、睑板腺分泌物性状评分及睑板腺缺失评分比较,除睑缘评分,中度及重度症状组之间无统计学差异外(P0.05),泪液分泌试验组间不存在统计学意义外(P0.05),其他参数差异均有统计学意义(P0.05)。4.分别对OMGD患者的上、下睑进行Marx线与睑板腺开口位置评分、睑板腺分泌物性状评分及睑板腺缺失评分比较,下睑的损伤程度重于上睑,差异有统计学意义(P0.05)。5.超高液相色谱-质谱(UPLC-ESI-QTOF-MS)技术可鉴定出睑板腺分泌物成分,采用主成分分析法对两组数据进行无监督分析,样本聚类良好,运用正交偏最小二乘判别分析构建的统计学模型,结合模型获得的VIP1值及T-检验的P0.05,最终获得11个差异代谢物,数据库中检索到分子式,OMGD组4-Methyl-3-heptyl linoleate、PC(16:0/0:0)、PC(15:0/0:0)、PE(19:0/0:0)、TG(15:0/16:0/17:1)、PC(16:0/5:0(COOH))较正常组相对含量减少,PS(22:2/22:6)、PS(13:0/13:0)、Cer(d18:1/24:1)、Cer(d18:1/16:0)及Cer(d18:1/20:0)相对含量增加。结论:1.OMGD可引起眼表、睑缘及睑板腺的形态学和功能改变,但对泪液分泌量影响较小,相对于泪液分泌的改变,睑缘和睑板腺的改变可能更早、更快、更严重;下睑睑板腺的形态学改变早于上睑,损伤程度大于上睑。OMGD组间,随OSDI评分升高,眼表、睑缘及睑板腺的形态学改变加重,但泪液分泌量改变不大。2.Marx线与睑板腺开口位置评分用来判断睑板腺功能,可作为一种简便、低侵袭的诊断工具用于OMGD的日常临床筛查中,NIBUT检查所得结果具有更好的精确度和重复性,Lipiview?干涉仪对泪膜脂质层厚度进行客观和定量测定,结果准确、具有可重复性,Keratograph 5M眼表分析仪对睑板腺形态学进行观察评估,结果准确可靠,以上可作为OMGD诊断的常规检查手段。3.OSDI、睑缘评分、睑板腺开口评分、ML评分、症状评分、睑板腺分泌状态、睑板腺缺失评分的ROC曲线下AUC面积较大(均90%),该7项指标在OMGD诊断中具有较强效力。4.OMGD患者眼表、睑缘及睑板腺参数之间存在相关性,要全面、统一、整体的分析眼表、睑缘及睑板腺的相互关系。5.UPLC-Q-TOF-MS的平台下,共鉴定出476个脂质分子,包括:脂肪酸,甘油三酯、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、神经酰胺、黄酮类化合物、糖脂及甾醇脂类等,筛选出11个差异代谢物,发现属于蜡酯类、甘油类及甘油磷脂类等6个差异代谢物在OMGD患者中有降低趋势,而属于鞘磷脂类的神经酰胺在OMGD组中有升高趋势,这些代谢物与甘油磷脂、鞘磷脂、甘油酯和固醇酯类等代谢相关,这些差异代谢物有望成为OMGD的发生、发展过程的生物标志物。
【图文】：

干涉仪,睑板腺

天津医科大学博士学位论文一、OMGD 患者及正常对照组睑板腺的形态学观察隆起；3 分，睑板腺开口严重阻塞或萎缩。注：脂帽为睑板腺开口可见较硬外壳的油帽状物覆盖，用针将其刺破，可见睑酯释放；隆起为睑板腺开口升高和凸出，常伴有睑缘表面充血；脂栓为睑板腺开口闭塞，被睑酯和角化的上皮细胞碎屑混合物堆积所致。1.1.2.6 泪膜脂质层厚度（LLT）的测定使用 Lipiview 干涉仪对泪膜脂质层厚度进行测定[13]。图 1-1 为 Lipiview 干涉仪，图 1-2 为 Lipiview 干涉仪检查时所拍摄的泪膜脂质层图片。具体操作如下：调整颌托高度，调整摄像头高度，瞳孔出现在实时视频中间，反射出的泪膜处于绿色定位方框之内。使用聚焦滑条，调整图像精度，以便获得居中且清晰泪膜图像，开始记录约 20 秒的视频。按需引导患者自然眨眼，对泪膜脂质层的分布进行评估。

脂质,干涉仪,睑板腺

天津医科大学博士学位论文一、OMGD 患者及正常对照组睑板腺的形态学观察隆起；3 分，睑板腺开口严重阻塞或萎缩。注：脂帽为睑板腺开口可见较硬外壳的油帽状物覆盖，用针将其刺破，可见睑酯释放；隆起为睑板腺开口升高和凸出，常伴有睑缘表面充血；脂栓为睑板腺开口闭塞，被睑酯和角化的上皮细胞碎屑混合物堆积所致。1.1.2.6 泪膜脂质层厚度（LLT）的测定使用 Lipiview 干涉仪对泪膜脂质层厚度进行测定[13]。图 1-1 为 Lipiview 干涉仪，图 1-2 为 Lipiview 干涉仪检查时所拍摄的泪膜脂质层图片。具体操作如下：调整颌托高度，调整摄像头高度，瞳孔出现在实时视频中间，反射出的泪膜处于绿色定位方框之内。使用聚焦滑条，，调整图像精度，以便获得居中且清晰泪膜图像，开始记录约 20 秒的视频。按需引导患者自然眨眼，对泪膜脂质层的分布进行评估。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R777.13

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