快速老化小鼠耳蜗NGF的表达分布和增龄性变化、以及pcDNA3-β-NGF的构建

发布时间：2020-02-27 21:51

【摘要】：目的：研究神经生长因子(nerve growth factor, NGF)在小鼠耳蜗中的表达分布、以及年龄相关性变化特点,构建真核表达载体pcDNA3-β-NGF,为老年性耳聋的NGF基因治疗提供支持。方法：选取5、7月龄的快速老化小鼠亚系8(Senescence accelerated dementia mouse/prone, SAMP8)作为实验组,而同龄抗快速老化小鼠亚系1(Senescence accelerated mouse/resistance1, SAMR1)作为SAMP8的正常对照组；应用免疫组织化学染色方法分别观察其耳蜗中神经生长因子(NGF)的表达分布情况、以及增龄性变化特点。取胎脑组织50g,提取RNA,经RT-PCR、XhoI和HindⅢ双酶切及T4连接酶连接构建真核表达载体pcDNA3-β-NGF。结果：1、NGF在小鼠耳蜗的表达分布、以年龄相关性变化特点：在小鼠耳蜗中,神经生长因子在螺旋神经节细胞、内外毛细胞、听神经纤维及血管纹中均有表达,且螺旋神经节细胞、以及内外毛细胞为主要表达部位。耳蜗螺旋神经节细胞、以及内外毛细胞NGF免疫组化染色平均光密度值：耳蜗NGF免疫组化染色图象分析,与对照组比较,第5、7月龄SAMP8小鼠耳蜗螺旋神经节细胞、以及毛细胞中的NGF蛋白表达较同龄SAMR1小鼠明显降低(P0.05)；各组小鼠耳蜗螺旋神经节细胞NGF免疫组化染色平均光密度值分别为：5月龄实验组SAMP8小鼠：0.281±0.005,5月龄对照组SAMR1小鼠：0.420±0.039,7月龄实验组SAMP8小鼠：0.220±0.008,7月龄对照组SAMR1小鼠：0.342±0.017。7月龄SAMP8与5月龄SAMP8进行组内比较P0.01；7月龄SAMP8与7月龄SAMR1进行组间比较p0.01；5月龄SAMP8与5月龄SAMR1进行组间比较P0.01有显著性差异。 各组小鼠耳蜗毛细胞NGF免疫组化染色平均光密度值分别为：5月龄实验组SAMP8小鼠：0.291±0.007,5月龄对照组SAMR1小鼠：0.410±0.011,7月龄实验组SAMP8小鼠：0.213±0.009,7月龄对照组SAMR1小鼠：0.334±0.012。7月龄SAMP8与5月龄SAMP8进行组内比较P0.01；7月龄SAMP8与7月龄SAMR1进行组间比较P0.01；5月龄SAMP8与5月龄SAMR1进行组间比较P0.01有显著性差异。 2、真核表达载体pcDNA3-β-NGF的构建：人β-NGF与质粒载体pcDNA3连接后的重组质粒、经双酶切鉴定、以及序列检测后证实与人β-NGF序列完全相符。结论：NGF蛋白在小鼠耳蜗中广泛表达,并且其表达水平随着小鼠年龄增长而降低,说明NGF基因可能与维持耳蜗的功能状态有关。人(3-NGF与质粒载体pcDNA3连接后符合人NGF基因序列,可以为在NGF基因水平展开老年性耳聋的防治实验研究提供支持。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R764

【参考文献】

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本文编号：2583379