3D共培养模型对体外培养兔角膜缘干细胞的影响

发布时间：2020-03-22 20:00

【摘要】：目的:探讨三维共培养模型(three-dimensionalco-culturemodel,3D共培养模型)对体外扩增兔角膜缘干细胞(limbalstemcells,LSCs)的作用。方法:体外培养兔LSCs,以牙周膜干细胞(humanperiodontalligamentstemcell,HPDLSCs)作为饲细胞建立共培养模型,根据载体不同分组,纤维蛋白胶组将兔LSCs、HPDLSCs、纤维蛋白胶3D共培养;羊膜组将兔LSCs、HPDLSCs、羊膜3D共培养;对照组将兔LSCs、HPDLSCs共培养。共培养5d后,用倒置显微镜、HE染色、扫描电镜观察兔LSCs的细胞形态,采用免疫荧光染色检测各组兔LSCs阳性标志物p63的表达,并比较各组阳性率。结果:共培养5d后,倒置显微镜、HE染色观察细胞形态,羊膜组、纤维蛋白胶组细胞排列紧密,呈大小不等的团块状集落,细胞大小基本一致;对照组细胞排列相对稀疏;扫描电镜下观察见纤维蛋白胶组、羊膜组细胞与载体贴附良好。免疫荧光染色显示纤维蛋白胶组、羊膜组和对照组LSCs的p63阳性率分别为(69.93±8.76)%、(78.36±8.56)%和(58.59±8.31)%,三组间总体比较差异有统计学意义(F=9.43,P=0.00)。两两比较中纤维蛋白胶组、羊膜组LSCs的p63阳性率均大于对照组,差异均有统计学意义(均为P0.05)。纤维蛋白胶组、羊膜组的p63阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:以纤维蛋白胶、羊膜作为载体,HPDLSCs作为饲细胞的3D共培养模型有助于体外扩增兔角膜缘干细胞。
【图文】：

图 1A P3代 HPDLSCs细胞大小均一Fig.1AUniformsizeofthirdgenerationcells面标志物的表达果显示，间充质干细胞表面标志物 CD90（D34（0.3％）低表达。体及羊膜载体大体形态观察及结构半透明凝胶状，厚约 1mm，易从 24孔板平均孔径约为 80um，扫描电镜观察呈不规，各孔隙间相互连接。羊膜载体厚约 400载体密集，HE染色可见上皮细胞层、基质皮细胞层为单层上皮细胞，排列整齐，基学观察细胞，第 2天见细胞贴壁生长，3天可见细

DLSCs量逐渐减少。扫描电镜结果显示：纤维蛋白胶载体和羊膜载体，呈不状的立体空间结构，表面纵横交错，各孔隙间相互连接；纤维蛋白载体组体组培养的角膜缘干细胞均匀附着在载体骨架上，并可观察到分裂象的细胞-C)；HE染色见 LSCs呈圆形或椭圆形，纤维蛋白胶组和羊膜组细胞数量相对较照组细胞排列相对稀疏（图 2D-F)。
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R77

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本文编号：2595547