HSP60在大鼠耳蜗发育和药物性聋过程中的表达

发布时间：2017-03-22 22:12

  本文关键词：HSP60在大鼠耳蜗发育和药物性聋过程中的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：感音神经性聋是耳科的常见病,耳蜗毛细胞的损伤是引起感音神经性聋的重要原因,如何防止毛细胞损伤、保护毛细胞是我们研究的重要课题。热休克蛋白是在真核和原核生物中都广泛表达,进化中高度保守的一类蛋白质,有一个共同的特性就是提高细胞的应激能力,对细胞起到保护作用。热休克蛋白60(Heat Shock protein,HSP60)是分子量为60 k Da的热休克蛋白家族,目前研究在神经退行性疾病的发生、发展中起着重要的作用,本研究中我们检测了HSP60在SD大鼠耳蜗发育过程中和药物性耳聋模型中的表达变化,结果提示随着耳蜗的发育中,HSP60表达量逐渐升高,大鼠药物性耳聋模型中HSP60的表达量升高。通过耳蜗免疫荧光染色和免疫组织化学染色,我们定位HSP60在耳蜗中表达于Corti器的部分支持细胞中。推测HSP60在大鼠耳蜗的发育过程和药物性耳聋发生过程中,可能介导支持细胞对毛细胞的保护作用。实验一HSP60在大鼠耳蜗发育中的表达目的检测HSP60在大鼠耳蜗发育中的表达变化,观察HSP60在耳蜗发育中的表达分布。方法SD大鼠50只,雌雄不限,按出生后天数分为五组:P0、P3、P7、P14和P28。实时定量PCR和Western Blot分别检测HSP60的m RNA和蛋白表达量的变化;免疫荧光组织化学染色,观察HSP60在耳蜗的表达部位分布及表达变化。结果实时定量PCR和Western Blot的结果显示HSP60在SD大鼠出生后即有表达,呈增长趋势,到P14时,与前三组有统计学差异(P0.05),P28与P14相同而维持稳定状态(P0.05)。免疫荧光染色,观察到HSP60于P0-P7没有明显阳性表达,P14和P28表达于Corti器的部分支持细胞。结论大鼠出生后HSP60在耳蜗中表达量呈增长趋势,表达于Corti器的支持细胞中,可能在耳蜗发育过程中对毛细胞起到了保护作用。实验二HSP60在药物性耳聋大鼠耳蜗中的表达变化目的检测HSP60在大鼠耳蜗的表达分布及硫酸卡那霉素和呋塞米损伤下的表达变化。方法正常成年SD大鼠20只,雌雄不限,随机分为两组:对照组和实验组(D7组),实验组给予呋塞米100mg/kg颈静脉注射,而后立即硫酸卡那霉素500mg/kg后腿内侧肌肉注射;对照组相应的注射等量的生理盐水。ABR检测听力变化;实时定量PCR检测HSP60的m RNA表达量的变化;免疫荧光染色观察HSP60在耳蜗中的表达变化及分布。结果ABR检测显示实验组较对照组明显升高(P0.05),且频率越高,升高越明显。实时定量PCR结果显示D7组HSP60表达量升高(P0.05)。冰冻切片免疫荧光染色和免疫组织化学染色,观察到HSP60表达于Corti器上的支持细胞内。冰冻切片免疫组织化学染色和基底膜铺片免疫荧光染色,观察到D7组HSP60表达升高。结论HSP60表达于支持细胞,正常生理情况下即表达,药物中毒性耳聋模型中表达量升高,推测HSP60可能参与了药物性耳聋的发生过程。
【关键词】：热休克蛋白60 支持细胞 听力损失
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R764.43
【目录】：

• 缩略语表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文献回顾14-22
• 实验一 HSP60在大鼠耳蜗发育中的表达22-37
• 1 材料22-25
• 1.1 实验动物22
• 1.2 主要试剂22-23
• 1.3 主要仪器23-24
• 1.4 溶液配制24-25
• 2 方法25-32
• 2.1 实验安排25
• 2.2 耳蜗样本取材25-26
• 2.3 实时定量PCR26-28
• 2.4 Western Blot28-31
• 2.5 免疫荧光染色31-32
• 2.6 统计学分析32
• 3 结果32-35
• 3.1 HSP60在耳蜗不同发育阶段耳蜗中的表达变化32-33
• 3.2 HSP60在耳蜗不同发育阶段耳蜗中的表达部位33-35
• 4 讨论35-37
• 实验二 HSP60在药物性耳聋大鼠耳蜗中的表达变化37-53
• 1 材料37-39
• 1.1 实验动物37
• 1.2 主要试剂37-38
• 1.3 主要仪器38-39
• 1.4 溶液配制39
• 2 方法39-45
• 2.1 实验安排39
• 2.2 ABR检测39-40
• 2.3 耳蜗样本取材40
• 2.4 实时定量PCR40-43
• 2.5 免疫荧光染色43-44
• 2.6 扫描电镜观察44
• 2.7 免疫组化染色44-45
• 2.8 统计学分析45
• 3 结果45-50
• 3.1 药物诱导大鼠耳聋模型的建立45-47
• 3.2 HSP60在药物性耳聋中的表达变化47-50
• 4 讨论50-53
• 小结53-55
• 参考文献55-61
• 附录61-62
• 个人简历和研究成果62-63
• 致谢63

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本文编号：262319