枸杞多糖对大鼠缺血再灌注视网膜保护作用的实验研究

发布时间：2020-06-29 07:04

【摘要】：目的:(1)探讨枸杞多糖对大鼠视网膜缺血再灌注损伤是否有保护作用(2)枸杞多糖对大鼠视网膜缺血再灌注损伤保护作用可能的机制,为缺血再灌注损伤视网膜的治疗提供理论依据和新的诊治途径。方法:(1)把健康成年雄性SD大鼠55只作为实验对象,体重范围在200-300g,购自南昌大学动物科学研究所,数字表法随机分成空白对照组简称假手术组、缺血再灌注组简称模型组、缺血再灌注模型+枸杞多糖组简称LBP药物组,假手术组5只,其他两组每组25只,每组分总共5个时间点(6h、12h、24h、48h、72h、),各时间点5只,在室温,给予充足食物与水,12h光照,12h黑夜下适应性生活7天。(2)LBP药物组SD雄性大鼠给与4ml/100g的枸杞多糖溶液灌胃处理(每天一次,连续一周),模型组SD雄性大鼠和假手术组给与4ml/100g的0.9%氯化钠溶液处理(每天一次,连续一周)。(3)采取动脉夹夹闭大鼠右侧颈总动脉的方式制作视网膜缺血再灌注损伤模型。用动脉夹夹闭模型组、LBP药物组右侧颈总动脉(夹闭1小时),假手术组只进行手术操作暴露右颈总动脉不夹闭1小时。1小时后逐层缝合切口。(4)分别在缺血再灌注后6h、12h、24h、48h、72h后处理各组SD大鼠,在腹腔注射10%水合氯醛溶液行深度麻醉下处死SD大鼠,制作眼球标本行HE染色,在显微镜下观察视网膜各层形态结构的变化,用免疫组织化学染色的方法检测各组大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果:(1)HE染色结果:视网膜缺血再灌注后6小时,轻度视网膜水肿,视网膜厚度略有增加,神经纤维层和内丛状层水肿淡染,视网膜缺血再灌注后12,24小时,视网膜严重水肿,神经节细胞数减少,内核层较薄,细胞排列松散无序;48小时水肿消失,主要表现为视网膜神经节细胞数继续减少,内核层进一步变薄,可见空泡化;72小时视网膜变薄,视网膜细胞数量减少。与模型组(RIRI组)相比,药物组(LBP组)在6h和12h,24h时视网膜组织水肿缓解;24h,48h和72h较模型组神经节细胞减少较少,视网膜厚度无明显变化。药物组的视网膜各层结构基本上是排列有序的。(2)免疫组化结果:假手术组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数为(103.12±12.97个)mm~(-2),模型组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数在灌注后6h开始表达增多,阳性细胞数为(559.03?38.25)个·mm~(-2),24 h达到较高水平,阳性细胞数为(1528.12?52.74)个mm~(-2),随后逐渐下降,LBP药物组视网膜各时间点活性Caspase-3阳性细胞数均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P0.05)。假手术组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞,Bcl-2阳性细胞在缺血再灌注组RIRI后6h开始下降,12h后持续下降,24h下降至较低水平。在每个时间点,药物组中Bcl-2阳性细胞的数量显著高于缺血再灌注视网膜,差异均有统计学意义(均为P0.05)。Bax阳性细胞在假手术组大鼠表达较少;在缺血再灌注组中,在RIRI后6小时在神经节细胞层和内核层中观察到Bax阳性细胞,并且在24小时达到更高水平,并且在48小时开始减少。在每个时间点,药物组中的Bax阳性细胞显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P0.05)结论:(1)枸杞多糖对视网膜缺血再灌注损伤引起的视网膜损伤有保护作用。(2)其保护是抑制视网膜缺血再灌注损伤中的细胞凋亡,其机制是通过上调Bcl-2、下调Bax与Caspase-3表达有关。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R774.1
【图文】：

（RIRI组24hHE染色×400)

8 假手术组大鼠视网膜活性 Caspase-3 阳性细胞表达×2及 LBP 治疗组 Caspase-3 蛋白表达，缺血再灌注组视网膜活性 Caspase-3 阳性细胞数高水平，然后逐渐下降。在每个时间点，药物组细胞数明显少于缺血再灌注组，差异有统计学意义表 1)。组 Caspase-3 蛋白表达×200 图 10LBP 治疗组 Caspase-

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 王雪维;李燕;;Bcl-2、Bax在青光眼神经节细胞凋亡中的研究进展[J];医学综述;2015年22期

2 王t

本文编号：2733575