SLIM1对脉络膜黑色素瘤糖酵解的调控与机制研究
发布时间：2020-07-28 13:11
【摘要】：目的1、探讨SLIM1基因是否通过糖酵解途径进而对脉络膜黑色瘤生长产生影响。2、探讨SLIM1基因抑制脉络膜黑色素瘤的生长是否与c-Myc介导调控的糖酵解有关。方法1、将处于指数生长期的MUM-2B细胞用胰酶消化后随机分为四组,均匀铺至4个6 cm培养皿中,分为ABCD四组:A组转染空载质粒;B组转染SLIM1质粒;C组转染空载质粒,然后加2-DG试剂;D组转染SLIM1质粒,然后加2-DG试剂。采用CCK-8实验方法检测细胞的增殖情况;采用克隆形成实验方法检测细胞的克隆形成状况,进而探讨SLIM1基因对脉络膜黑色瘤生长功能的影响是否与糖酵解有关。2、将处于指数生长期的MUM-2B细胞用胰酶消化后随机分为四组,均匀铺至4个6 cm培养皿中,分为ABCD四组:A组转染空载质粒;B组转染SLIM1质粒;C组转染空载质粒+c-Myc SiRNA;D组转染SLIM1+c-Myc SiRNA。采用Western Blot实验方法检测c-Myc蛋白的表达情况;采用CCK-8实验方法检测细胞的增殖情况;采用克隆形成实验方法检测细胞的克隆形成状况;采用乳酸实验方法、ATP实验方法和葡萄糖摄取实验方法检测各组细胞产生乳酸、ATP和葡萄糖摄取的能力;采用细胞外酸化率、氧消耗率实验方法检测各组细胞的细胞外酸化率、氧消耗率,进而探讨SLIM1基因抑制脉络膜黑色素瘤的生长是否与c-Myc介导调控的糖酵解有关。结果1、CCK-8生长曲线实验结果表明,与转染空载质粒的MUM-2B细胞相比,过表达SLIM1的MUM-2B细胞增殖能力降低;与转染空载质粒的MUM-2B细胞相比,加入2-DG试剂后细胞增殖能力降低;与只转染SLIM1和空载质粒的两组细胞增殖能力的差异相比,加入2-DG试剂后差异变小,意味着2-DG试剂使SLIM1质粒对MUM-2B细胞增殖的抑制能力减弱;克隆形成实验结果表明,与转染空载质粒的MUM-2B细胞相比,过表达SLIM1的MUM-2B细胞克隆形成能力降低;与转染空载质粒的MUM-2B细胞相比,加入2-DG试剂后细胞克隆形成能力降低,表现为克隆直径小、克隆数量少;与只转染SLIM1和空载质粒的两组细胞克隆形成能力的差异相比,加入2-DG试剂后差异变小,意味着2-DG试剂使SLIM1质粒对脉络膜黑色素瘤细胞克隆形成的抑制能力减弱。2、Western Blot实验结果表明,敲低c-Myc的两组MUM-2B细胞内c-Myc蛋白表达水平下降。3、CCK-8及克隆形成实验结果表明,和转染空载质粒的MUM-2B细胞相比,过表达SLIM1质粒后MUM-2B细胞的增殖和克隆形成能力降低;与只转染SLIM1和空载质粒的两组细胞增殖及克隆形成能力的差异相比,敲低c-Myc后两组细胞的差异变小,表明敲低c-Myc后SLIM1质粒抑制MUM-2B细胞的增殖及克隆形成能力减弱。4、乳酸检测、ATP检测和葡萄糖摄取、细胞外酸化率、氧消耗率实验结果表明,与转染空载质粒组相比,过表达SLIM1质粒后MUM-2B细胞的乳酸、ATP产生、葡萄糖摄取、细胞外酸化率降低,过表达SLIM1质粒后MUM-2B细胞氧消耗率升高;与只转染SLIM1质粒和转染空载质粒细胞的抑制乳酸、ATP产生和葡萄糖摄取、促进MUM-2B细胞氧消耗率的差异相比,敲低c-Myc后两组细胞的差异变小。结论1、SLIM1基因通过糖酵解途径抑制脉络膜黑色瘤生长功能。2、SLIM1基因通过糖酵解途径抑制脉络膜黑色素瘤的生长功能与c-Myc有关。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.7
【图文】：
图 1 SLIM1 通过糖酵解抑制 MUM-2B 细胞的增殖能力：（1）转染空载质粒；（2）转染 SLIM1 质粒；（3）转染空载质粒加 2-DG 试剂1 质粒加 2-DG 试剂示与转染空载质粒组相比，差异具有统计学意义，P＜0.05。
SLIM1 通过糖酵解抑制 MUM-2B 细胞的克载质粒；（2）转染 SLIM1 质粒；（3）转染空载质粒DG 试剂载质粒组相比，差异具有统计学意义，P＜0.05。 MUM-2B 细胞的克隆形成能力的比较（ N，分组 N 细胞克隆数EVSLIM1+2-DGM1+2-DG6666586.104±3361.293±28215.494±16180.510±41F 值 92.693P 值 0.000染空载质粒组相比，差异具有统计学意义，P＜0.05讨 论
图 3 Western Blot 检测 c-Myc 蛋白的表达水平转染空载质粒；（2）转染 SLIM1 质粒；（3）转染空载质粒，敲低粒，敲低 c-Myc-8 生长曲线实验结果
本文编号：2772924
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.7
【图文】：
图 1 SLIM1 通过糖酵解抑制 MUM-2B 细胞的增殖能力：（1）转染空载质粒；（2）转染 SLIM1 质粒；（3）转染空载质粒加 2-DG 试剂1 质粒加 2-DG 试剂示与转染空载质粒组相比，差异具有统计学意义，P＜0.05。
SLIM1 通过糖酵解抑制 MUM-2B 细胞的克载质粒；（2）转染 SLIM1 质粒；（3）转染空载质粒DG 试剂载质粒组相比，差异具有统计学意义，P＜0.05。 MUM-2B 细胞的克隆形成能力的比较（ N，分组 N 细胞克隆数EVSLIM1+2-DGM1+2-DG6666586.104±3361.293±28215.494±16180.510±41F 值 92.693P 值 0.000染空载质粒组相比，差异具有统计学意义，P＜0.05讨 论
图 3 Western Blot 检测 c-Myc 蛋白的表达水平转染空载质粒；（2）转染 SLIM1 质粒；（3）转染空载质粒，敲低粒，敲低 c-Myc-8 生长曲线实验结果
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 杨秀梅;王雨生;屈小杰;段春光;徐建锋;;内皮祖细胞参与大鼠脉络膜新生血管生成的可能机制[J];中华眼科杂志;2012年07期
2 王风华;脉络膜黑色素瘤的临床、组织病理学特点及研究进展[J];国外医学.眼科学分册;2001年06期
本文编号：2772924
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