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蒿属花粉过敏性鼻炎患者外周血有核细胞DNA甲基化相关位点的筛选

发布时间:2020-09-29 22:05
   目的:拟通过对蒿属花粉过敏性鼻炎患者外周血有核细胞进行全基因组甲基化测序分析,筛选与过敏性鼻炎相关的DNA甲基化差异位点,为研究过敏性鼻炎发生及发展机制提供依据,并为涉及过敏性猝死的法医学鉴定提供思路。方法:实验分为2组,蒿属花粉过敏性鼻炎组9例,健康对照组9例;采集外周静脉血血10ml。过敏性鼻炎患者及健康对照组各3例,进行全基因组甲基化测序分析,包括测序深度及覆盖率、比对到基因组、CG甲基化统计、差异甲基化区域(DMR)分析、差异甲基化区域注释。对测序分析得到的差异甲基化位点通过R语言进行随机森林分析,进一步筛选出显著差异位点。蒿属花粉过敏性鼻炎患者及健康对照组各6例对筛选获得DNA甲基化差异位点进行PCR验证。结果:(1)本次测序各样本平均测序覆盖度达91.71%,平均测序深度11.41;测序样本比对到基因组,各样本比对率平均约78.9%。(2)通过生物学信息分析及R语言随机森林包统计分析筛选出与蒿属花粉过敏相关DNA甲基化差异位点62个。(3)进一步设限筛选获得与蒿属花粉过敏相关DNA甲基化差异位点3个。结论:(1)蒿属花粉过敏性鼻炎患者与健康人群外周血有核细胞DNA甲基化存在差异。(2)SEC63、RUNX1T1、SMARCA2甲基化异常参与了过敏性鼻炎的发病过程。
【学位单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2019
【中图分类】:R765.21
【部分图文】:

序列,统计原理,测序,参照基因


测序深度是指原始数据经过滤后生成的高质量序列总量与基因组大小的比值,它可以用作评估测序质量的指标,测序深度越深,测序错误率及假阳性出现概率越小。1.2.6.2 比对到基因组(Mapping)参照基因组:GRCh38ftp://ftp.ensembl.org/pub/release-89/fasta/homo_sapiens/dna/参照基因组注释:Ensembl89ftp://ftp.ensembl.org/pub/release-89/genbank/homo_sapiens/分析软件:Bismark0.19.0http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/bismark/Bowtie22.2.3http://bowtie-bio.sourceforge.net/bowtie2/index.shtmlBismark【10】通过 Bowtie2【11-12】将 reads 比对到基因组,并识别碱基颠换事件,最后分类、统计,原理如图 1 所示:

原理图,甲基化,事件,原理


山西医科大学硕士学位论文1.2.6.3 基因区域甲基化分布统计参照基因组注释:Ensembl89ftp://ftp.ensembl.org/pub/release-89/genbank/homo_sapiens/分析软件: RSeQC 2.5 http://rseqc.sourceforge.net 通过 RSeQC【13】统计甲基化分布在基因不同区域的情况1.2.6.4 甲基化事件检测及测序覆盖度、深度统计Bismark 检测识别甲基化事件的原理如图 2 所示:

质量分布图,数据单,碱基,测序


11图 3.测序数据单碱基质量分布图Figure3.Single base mass distribution map of sequencing data注:X 轴是 reads 中碱基的位置(5’>3’),Y 轴是该位点的碱基 Q 值统计。红色的线为中位数,蓝色的线为平均数,黄色的长方形为 25%-75%区间,触须为 10%-90%区间。通常来说,reads 两端的碱基质量较低,中间部分的碱基质量较高。本次测序大部分序列的 Q值> 20 ,说明测序质量较好。2.1.2 Base content 分布检验测序数据是否存在 GC、 AT 分离的情况,可用 Base content 分布来判断。一般这种现象在建库和测序过程中引入,对之后的生物信息分析结果产生干扰。本次测序的 Base

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6 陈R

本文编号:2830327


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