FGF2在2-APB/SOCE介导的脉络膜黑色素瘤迁移过程中作用的实验研究
发布时间：2020-12-06 00:21
目的:1、研究恶性脉络膜黑色素瘤组织（UM）中成纤维细胞生长因子2（FGF2）的表达情况。2、证明通过FGF2刺激人侵袭性脉络膜黑色素瘤（MUM2B）细胞系,使肿瘤细胞的规模更大而且更倾向于迁移。而这一过程是通过钙存储通道（SOCE）调控钙释放激活钙调因子1（Orai1）和基质细胞反应分子1（STIM1）的表达实现的。3、验证钙通道阻滞剂三磷酸肌醇受体拮抗剂（2-APB）阻止了由FGF2引起的肿瘤细胞的迁移作用。方法:1.收集恶性脉络膜黑色素瘤病人的一般情况以及肿瘤组织（原位癌组织和肝肺转移癌组织）等的临床资料。HE切片染色和免疫组化检测FGF2在肿瘤中的表达,并分析FGF2水平和临床病理类型等参数的关系。同时对比在样本中Orai1和STIM1蛋白的表达情况。2.将MUM2B细胞分为三组,肿瘤细胞组（对照组）、肿瘤细胞+FGF2组（FGF2组）、肿瘤细胞+FGF2+2-APB组（FGF2/2-APB组）,用Fluo3-AM作为钙离子指示剂染色细胞内的钙离子,然后再用流式细胞仪检测三组中钙离子的含量。3.采用Western-Blot方法测定对照组、FGF2组、FGF2/2-APB组中的O...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
FGF2在人脉络膜黑色素瘤组织中的表达
图 2 FGF2 对细胞内 Ca2+浓度的影响及钙通道调控蛋白的表达(A)FGF2 刺激升高细胞内浓度，2-APB 逆转这种效应(左)；(B)FGF2 刺激增加 MUM2B 细胞 STIM1 和 ORAI1 的表达2-APB 逆转这种效应(左)。STIM1 和 ORAI1 与β-actin 蛋白的相对表达量比较(右)(*P<0.05+FGF2 组的细胞和对照组比较；FGF2/2-APB 处理组的细胞和 FGF2 组的细胞比较**P<0.05Figure 2 The effect of FGF2 on intracellular Ca2+concentration and expression of store-operated calciuentry-regulated proteins. (A) FGF2 stimulation elevated intracellular calcium concentration, and 2-APreversed this effect (left); (B) FGF2 stimulation increased the expression of STIM1 and ORAI1 of MUMcells, and 2-APB reversed this effect (left). Relative amounts of protein expression of STIM1 and ORAcompared with -actin (right) (*P<0.05 between FGF2-treated cells and the control cells, **P<0.05 betweFGF2/2-APB-treated cells and the FGF2-treated cells).2.3 FGF2 加速了 MUM2B 细胞创伤愈合
图 3 2-APB 阻止了如下作用：由 FGF2 引起的 MUM2B 细胞水平和垂直迁移的增力的降低。（A）创伤愈合试验在 0, 12 和 24 小时的图像（100r）（左）。在创伤愈不同时间的迁移距离(右)；(B)对侵入 Boyden 室的细胞进行染色(200r)(左)。在 5 个计数侵袭细胞数(右)；(C)在 5 倍高倍镜区域计数结合细胞数(200r)(*P<0.05，在 FG和 control 组之间比较，**P<0.05FGF2/2-APB 细胞组和 FGF2 细胞组之间比较)Figure 3 2-APB impairs increased horizontal and vertical migration and decreased MUM2BcellscausedbyFGF2.(A)Imagesofwoundhealingassayat0,12, and 24 h (Migration distances at different times in the wound healing assay (right); (B) Celthrough the Boyden chamber were stained (200r) (left). The numbers of invadingcounted in five predetermined fields (right); (C) The numbers of bound cells werefive high magnification (200r) fields (*P<0.05 between FGF2-treated cells and the c**P<0.05betweenFGF2/2-APB-treatedcellsandthe FGF2-treatedcells).
【参考文献】：
期刊论文
[1]脉络膜黑色素瘤的研究进展[J]. 裴超,刘静霞. 国际眼科杂志. 2017(12)
[2]SOCE在消化道肿瘤细胞增殖及迁移中的调控作用[J]. 孔瑞,卢洁. 胃肠病学和肝病学杂志. 2017(11)
[3]2-APB对自发性高血压大鼠脑微动脉平滑肌细胞缝隙连接的影响[J]. 王洋,马克涛,张雯,李丽,赵磊,魏丽丽,司军强. 石河子大学学报(自然科学版). 2014(03)
[4]STIM/SOCE通路参与细胞功能调控的研究进展[J]. 马腾,全弘宇,赵柏雄,李红丽. 中国细胞生物学学报. 2014(05)
[5]脉络膜黑色素瘤发生机制的研究进展[J]. 张薇,何彦津. 眼科研究. 2010(05)
[6]姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞表达Survivin、Bcl-2、Bax的影响[J]. 刘波,白庆咸,陈协群,高广勋,顾宏涛. 中国实验血液学杂志. 2007(04)
[7]中药活性成分对卵巢癌的直接作用机制研究进展[J]. 郭方,徐丛剑. 中国中西医结合杂志. 2005(12)
[8]姜黄素和儿茶素联用对二甲基肼诱导的大鼠大肠癌变过程中环氧合酶2表达的影响[J]. 许刚,黄文,张卫民,赖卓胜,何美蓉,王亚东,张亚历. 第一军医大学学报. 2005(01)
[9]姜黄素对膀胱癌EJ细胞的作用研究[J]. 孙明,杨宇如,李虹,苏斌,卢一平,魏强,范天勇. 中药材. 2004(11)
[10]姜黄素诱导人卵巢癌细胞株A2780凋亡及其分子机制的研究[J]. 郑丽端,童强松,吴翠环. 癌症. 2002(12)
博士论文
[1]Butein通过线粒体途径诱导人葡萄膜黑色素瘤细胞凋亡[D]. 崔治华.吉林大学 2013
[2]STIM1/Orai1介导的Ca2+内流参与气道平滑肌细胞增殖[D]. 邹进晶.武汉大学 2011
硕士论文
[1]Orai1和STIM1在姜黄素诱导的非小细胞肺癌细胞凋亡中的作用[D]. 林丹苗.南方医科大学 2013
本文编号：2900355
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
FGF2在人脉络膜黑色素瘤组织中的表达
图 2 FGF2 对细胞内 Ca2+浓度的影响及钙通道调控蛋白的表达(A)FGF2 刺激升高细胞内浓度，2-APB 逆转这种效应(左)；(B)FGF2 刺激增加 MUM2B 细胞 STIM1 和 ORAI1 的表达2-APB 逆转这种效应(左)。STIM1 和 ORAI1 与β-actin 蛋白的相对表达量比较(右)(*P<0.05+FGF2 组的细胞和对照组比较；FGF2/2-APB 处理组的细胞和 FGF2 组的细胞比较**P<0.05Figure 2 The effect of FGF2 on intracellular Ca2+concentration and expression of store-operated calciuentry-regulated proteins. (A) FGF2 stimulation elevated intracellular calcium concentration, and 2-APreversed this effect (left); (B) FGF2 stimulation increased the expression of STIM1 and ORAI1 of MUMcells, and 2-APB reversed this effect (left). Relative amounts of protein expression of STIM1 and ORAcompared with -actin (right) (*P<0.05 between FGF2-treated cells and the control cells, **P<0.05 betweFGF2/2-APB-treated cells and the FGF2-treated cells).2.3 FGF2 加速了 MUM2B 细胞创伤愈合
图 3 2-APB 阻止了如下作用：由 FGF2 引起的 MUM2B 细胞水平和垂直迁移的增力的降低。（A）创伤愈合试验在 0, 12 和 24 小时的图像（100r）（左）。在创伤愈不同时间的迁移距离(右)；(B)对侵入 Boyden 室的细胞进行染色(200r)(左)。在 5 个计数侵袭细胞数(右)；(C)在 5 倍高倍镜区域计数结合细胞数(200r)(*P<0.05，在 FG和 control 组之间比较，**P<0.05FGF2/2-APB 细胞组和 FGF2 细胞组之间比较)Figure 3 2-APB impairs increased horizontal and vertical migration and decreased MUM2BcellscausedbyFGF2.(A)Imagesofwoundhealingassayat0,12, and 24 h (Migration distances at different times in the wound healing assay (right); (B) Celthrough the Boyden chamber were stained (200r) (left). The numbers of invadingcounted in five predetermined fields (right); (C) The numbers of bound cells werefive high magnification (200r) fields (*P<0.05 between FGF2-treated cells and the c**P<0.05betweenFGF2/2-APB-treatedcellsandthe FGF2-treatedcells).
【参考文献】：
期刊论文
[1]脉络膜黑色素瘤的研究进展[J]. 裴超,刘静霞. 国际眼科杂志. 2017(12)
[2]SOCE在消化道肿瘤细胞增殖及迁移中的调控作用[J]. 孔瑞,卢洁. 胃肠病学和肝病学杂志. 2017(11)
[3]2-APB对自发性高血压大鼠脑微动脉平滑肌细胞缝隙连接的影响[J]. 王洋,马克涛,张雯,李丽,赵磊,魏丽丽,司军强. 石河子大学学报(自然科学版). 2014(03)
[4]STIM/SOCE通路参与细胞功能调控的研究进展[J]. 马腾,全弘宇,赵柏雄,李红丽. 中国细胞生物学学报. 2014(05)
[5]脉络膜黑色素瘤发生机制的研究进展[J]. 张薇,何彦津. 眼科研究. 2010(05)
[6]姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞表达Survivin、Bcl-2、Bax的影响[J]. 刘波,白庆咸,陈协群,高广勋,顾宏涛. 中国实验血液学杂志. 2007(04)
[7]中药活性成分对卵巢癌的直接作用机制研究进展[J]. 郭方,徐丛剑. 中国中西医结合杂志. 2005(12)
[8]姜黄素和儿茶素联用对二甲基肼诱导的大鼠大肠癌变过程中环氧合酶2表达的影响[J]. 许刚,黄文,张卫民,赖卓胜,何美蓉,王亚东,张亚历. 第一军医大学学报. 2005(01)
[9]姜黄素对膀胱癌EJ细胞的作用研究[J]. 孙明,杨宇如,李虹,苏斌,卢一平,魏强,范天勇. 中药材. 2004(11)
[10]姜黄素诱导人卵巢癌细胞株A2780凋亡及其分子机制的研究[J]. 郑丽端,童强松,吴翠环. 癌症. 2002(12)
博士论文
[1]Butein通过线粒体途径诱导人葡萄膜黑色素瘤细胞凋亡[D]. 崔治华.吉林大学 2013
[2]STIM1/Orai1介导的Ca2+内流参与气道平滑肌细胞增殖[D]. 邹进晶.武汉大学 2011
硕士论文
[1]Orai1和STIM1在姜黄素诱导的非小细胞肺癌细胞凋亡中的作用[D]. 林丹苗.南方医科大学 2013
本文编号：2900355
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