线粒体融合蛋白2在小鼠角膜形态发育中的作用
发布时间：2020-12-09 10:50
目的:线粒体融合蛋白2（mitofusin 2）定位于线粒体外膜和线粒体相关的内质网膜中,参与调节线粒体形态和功能。Mfn2也被称为肿瘤抑制基因（HSG）,该基因无论在体内还是体外在控制细胞增殖和细胞凋亡方面都具有主要作用。研究表明参与线粒体融合和分裂的蛋白也广泛参与细胞过程,如线粒体代谢,氧化还原信号转导,维持mtDNA完整性和细胞死亡。眼科中的许多疾病,如白内障、青光眼、视网膜病变、角膜病变等都与细胞的增殖凋亡、线粒体功能改变相关。本研究旨在探讨在表面外胚层条件性敲除Mfn2基因引起小鼠角膜发育不良的形成原因。研究方法:1.使用Le-Cre转基因小鼠构建了基于loxp系统的Mfn2条件基因敲除小鼠（Mfn2 CKO）,在晶状体、角膜和眼睑等表皮外胚层选择性地敲除Mfn2基因。PCR进行基因型分析及确定。对选择携带Le-Cre+/-;Mfn2fl/fl基因的雄鼠与Mfn2fl/fl的雌鼠交配,将子代中Le-Cre+/-;Mfn2fl/fl（Mfn2 CKO）和Mfn2
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
实验动物培育图
图 2 PCR 鉴定方案分析 Mfn2 基因敲除鼠的基因型。胚层 Mfn2 基因条件性敲除导致小眼球畸形出生 2 个月大实验组与对照组小鼠进行眼部的大体照相，下图 a 和 b 对fn2 基因敲除小鼠眼裂小。将眼球取出后放入 1*PBS 的缓冲液中解剖显并拍照，下图 c 和 d 对比显示两组完整眼球差异为实验组小鼠的眼球虹膜与角膜相贴。2 组小鼠眼球的 HE 染色结果在下图 e 和 f 对比显小鼠的整个眼球体积相比对照组减小，正常房角结构消失。图 e 和 f为 20um。分别对 2 组小鼠眼球进行免疫荧光实验验证 Mfn2 在蛋白达，结果显示实验组 h 中的 Mfn2 基因被敲除。（图 3）
图 3 条件性敲除表面外胚层上的 Mfn2 基因引起鼠眼形态改变3.3 Mfn2 CKO 鼠与 Mfn2 WT 鼠角膜发育差异3.3.1 条件敲除表面外胚层上 Mfn2 基因 HE 染色观察小鼠角膜形态发育差异为了观察 Mfn2 CKO 鼠角膜发育情况，选取 E15.5,16.5,17.5,P4 和 P60 的鼠取眼球进行 HE 染色。根据染色结果可以看出，在 E15.5 时，Mfn2 WT 小鼠角膜形态发育与正常小鼠一致，但 Mfn2 CKO 小鼠前房塌陷，角膜不与晶状体表面分离。从 E16.5 到 E17.5，Mfn2 CKO 小鼠的角膜厚度明显大于 Mfn2 WT小鼠。分别测量 Mfn2 CKO 小鼠和 Mfn2 WT 小鼠的角膜上皮、角膜基质和角膜内皮细胞厚度。与 Mfn2 WT 小鼠相比，Mfn2 CKO 小鼠的角膜上皮和角膜内皮未见明显异常，但角膜基质存在显著差异，Mfn2 CKO 小鼠的角膜基质厚度明显增加。在 P60 时，Mfn2 WT 小鼠有清晰的内皮层，角膜基质纤维呈平行排列。而在 Mfn2 CKO 小鼠中发现，角膜基质纤维随机排列，且厚度增加。故推测这
【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体融合蛋白2的结构与功能研究进展[J]. 应岚,卢中秋,姚咏明. 生理科学进展. 2016(02)
[2]线粒体融合蛋白-2的功能[J]. 朱学敏,孟庆华. 北京医学. 2015(12)
[3]线粒体DNA损伤与视网膜色素上皮细胞关系的研究进展[J]. 俞永珍,邹秀兰,邹玉平. 天津医药. 2015(09)
[4]线粒体融合蛋白2改善高脂诱导的骨骼肌细胞胰岛素抵抗机制的研究[J]. 聂倩,宋桉,王超,孔德贤,张雪梅,宋光耀. 中国糖尿病杂志. 2014(11)
[5]角膜发育的分子调控机制研究进展[J]. 何雪菲,赵江月,张劲松. 中华实验眼科杂志. 2011 (12)
[6]遗传性感觉神经病I型一家系调查[J]. 韩立影,方琪,俞立强. 中国误诊学杂志. 2011(25)
[7]mfn2基因转染对非酒精性脂肪肝细胞线粒体功能的影响[J]. 张勇,胡文君,王尧,夏耘,郑启昌. 中国病理生理杂志. 2010(03)
[8]视网膜色素上皮细胞线粒体DNA的氧化损伤研究[J]. 唐敏,樊莹,傅扬,顾青. 眼科研究. 2007(11)
[9]氧化应激与细胞凋亡关系的研究进展[J]. 褚启龙. 卫生研究. 2003(03)
本文编号：2906754
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
实验动物培育图
图 2 PCR 鉴定方案分析 Mfn2 基因敲除鼠的基因型。胚层 Mfn2 基因条件性敲除导致小眼球畸形出生 2 个月大实验组与对照组小鼠进行眼部的大体照相，下图 a 和 b 对fn2 基因敲除小鼠眼裂小。将眼球取出后放入 1*PBS 的缓冲液中解剖显并拍照，下图 c 和 d 对比显示两组完整眼球差异为实验组小鼠的眼球虹膜与角膜相贴。2 组小鼠眼球的 HE 染色结果在下图 e 和 f 对比显小鼠的整个眼球体积相比对照组减小，正常房角结构消失。图 e 和 f为 20um。分别对 2 组小鼠眼球进行免疫荧光实验验证 Mfn2 在蛋白达，结果显示实验组 h 中的 Mfn2 基因被敲除。（图 3）
图 3 条件性敲除表面外胚层上的 Mfn2 基因引起鼠眼形态改变3.3 Mfn2 CKO 鼠与 Mfn2 WT 鼠角膜发育差异3.3.1 条件敲除表面外胚层上 Mfn2 基因 HE 染色观察小鼠角膜形态发育差异为了观察 Mfn2 CKO 鼠角膜发育情况，选取 E15.5,16.5,17.5,P4 和 P60 的鼠取眼球进行 HE 染色。根据染色结果可以看出，在 E15.5 时，Mfn2 WT 小鼠角膜形态发育与正常小鼠一致，但 Mfn2 CKO 小鼠前房塌陷，角膜不与晶状体表面分离。从 E16.5 到 E17.5，Mfn2 CKO 小鼠的角膜厚度明显大于 Mfn2 WT小鼠。分别测量 Mfn2 CKO 小鼠和 Mfn2 WT 小鼠的角膜上皮、角膜基质和角膜内皮细胞厚度。与 Mfn2 WT 小鼠相比，Mfn2 CKO 小鼠的角膜上皮和角膜内皮未见明显异常，但角膜基质存在显著差异，Mfn2 CKO 小鼠的角膜基质厚度明显增加。在 P60 时，Mfn2 WT 小鼠有清晰的内皮层，角膜基质纤维呈平行排列。而在 Mfn2 CKO 小鼠中发现，角膜基质纤维随机排列，且厚度增加。故推测这
【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体融合蛋白2的结构与功能研究进展[J]. 应岚,卢中秋,姚咏明. 生理科学进展. 2016(02)
[2]线粒体融合蛋白-2的功能[J]. 朱学敏,孟庆华. 北京医学. 2015(12)
[3]线粒体DNA损伤与视网膜色素上皮细胞关系的研究进展[J]. 俞永珍,邹秀兰,邹玉平. 天津医药. 2015(09)
[4]线粒体融合蛋白2改善高脂诱导的骨骼肌细胞胰岛素抵抗机制的研究[J]. 聂倩,宋桉,王超,孔德贤,张雪梅,宋光耀. 中国糖尿病杂志. 2014(11)
[5]角膜发育的分子调控机制研究进展[J]. 何雪菲,赵江月,张劲松. 中华实验眼科杂志. 2011 (12)
[6]遗传性感觉神经病I型一家系调查[J]. 韩立影,方琪,俞立强. 中国误诊学杂志. 2011(25)
[7]mfn2基因转染对非酒精性脂肪肝细胞线粒体功能的影响[J]. 张勇,胡文君,王尧,夏耘,郑启昌. 中国病理生理杂志. 2010(03)
[8]视网膜色素上皮细胞线粒体DNA的氧化损伤研究[J]. 唐敏,樊莹,傅扬,顾青. 眼科研究. 2007(11)
[9]氧化应激与细胞凋亡关系的研究进展[J]. 褚启龙. 卫生研究. 2003(03)
本文编号：2906754
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