Gremlin-1促进视网膜色素上皮细胞上皮—间充质转化并干扰其再分化的研究
发布时间：2020-12-16 21:09
目的:探索Gremlin-1作为一种内源性骨形成蛋白（Bone morphogenetic protein,BMP）信号通路的抑制因子,对发生重复损伤的视网膜色素上皮细胞（Retinal pigmented epithelium,RPE）逐渐出现再分化障碍以及上皮间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用。方法:为了建立RPE细胞的重复损伤模型,反复传代培养的人胎儿视网膜色素上皮细胞（fetal RPE,fRPE）被认为是一种重复损伤模型。为了探究Gremlin-1的作用,我们利用重组人类Gremlin-1（0.1μg/ml·d）处理细胞,并且利用si RNA敲除GREM1来探索该基因表达下降后是否能够抑制EMT的发生。为判断细胞的形态学变化,我们利用相差显微镜观察细胞的形态,并且在亮视野下可以观察色素的形成,色素的出现意味着RPE细胞更趋向于正常的形态,并且在此基础上我们利用了细胞划痕实验来判断Gremlin-1对于细胞迁移率的影响。为了判断细胞是否有RPE细胞特定的功能,我们利用q-PCR来检测不同实验组的RPE细胞的基因表达:...
【文章来源】：南京医科大学江苏省
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A：第32天，未经任何处理的P2细胞具有正常的鹅卵石样外观，在亮视野中具有更多的色素，而P4细胞具有成纤维细胞样并失去色素
南京医科大学硕士学位论文中 GREM1 的相关表达低于第 4 代细胞。比例尺：Ph：100μm，Bf：500μm;数据表达为平均值±SEM（平均值的标准误），n = 3，**** P <0.0001，*** P <0.001，与 P2 代相比; #### P <0.0001，＃P <0.05 对比 P4 空白; Ph：相差显微镜; Bf：亮视野 CDH1：上皮标记; VIM：EMT 标记。
南京医科大学硕士学位论文为探讨胎儿RPE细胞和EMT细胞中GREM1的动态表达变化，我们分析了GREM1与 SNAI1 之间的关系。将进入 EMT 的 P4 代细胞以 10000 细胞/ cm2密度接种在培养皿中，分成两组：一组用 SB431542（10μm SB431542 组）处理，另一组为对照组未经任何处理（对照组），并在第 2,5,10,15 和 30 天在相差显微镜下观察细胞并收集相应细胞进行 q-PCR 分 GREM1、SNAI1 以及 RPE65 在不同组中的表达变化以及趋势。最终，在 SB431542 组中，细胞分化成 RPE 样细胞，而在对照组中，细胞逐渐形成成纤维细胞样形状（图 3A），GREM1 和 SNAI1 的表达在两组中具有相似的趋势。其中，在对照组中，SNAI1 随着 GREM1 的上调而逐渐上调，RPE65 同时持续保持低表达，同样的，SB431542 组中，SNAI1 具有与 GREM1 类似的低表达而 RPE65 则逐渐上调（图 3B）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]上皮-间充质转化在增生性玻璃体视网膜病变发病机制中的作用[J]. 刘帅,金海鹰. 国际眼科纵览. 2016 (04)
[2]老年性黄斑变性视网膜色素上皮细胞替代治疗研究进展[J]. 沈涵,刘庆淮,袁松涛. 中华眼底病杂志. 2016 (01)
[3]胎儿视网膜色素上皮细胞的原代培养和体外增殖能力的测定[J]. 袁松涛,薛志刚,林卿,刘庆淮,范国平. 中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2014(01)
本文编号：2920777
【文章来源】：南京医科大学江苏省
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A：第32天，未经任何处理的P2细胞具有正常的鹅卵石样外观，在亮视野中具有更多的色素，而P4细胞具有成纤维细胞样并失去色素
南京医科大学硕士学位论文中 GREM1 的相关表达低于第 4 代细胞。比例尺：Ph：100μm，Bf：500μm;数据表达为平均值±SEM（平均值的标准误），n = 3，**** P <0.0001，*** P <0.001，与 P2 代相比; #### P <0.0001，＃P <0.05 对比 P4 空白; Ph：相差显微镜; Bf：亮视野 CDH1：上皮标记; VIM：EMT 标记。
南京医科大学硕士学位论文为探讨胎儿RPE细胞和EMT细胞中GREM1的动态表达变化，我们分析了GREM1与 SNAI1 之间的关系。将进入 EMT 的 P4 代细胞以 10000 细胞/ cm2密度接种在培养皿中，分成两组：一组用 SB431542（10μm SB431542 组）处理，另一组为对照组未经任何处理（对照组），并在第 2,5,10,15 和 30 天在相差显微镜下观察细胞并收集相应细胞进行 q-PCR 分 GREM1、SNAI1 以及 RPE65 在不同组中的表达变化以及趋势。最终，在 SB431542 组中，细胞分化成 RPE 样细胞，而在对照组中，细胞逐渐形成成纤维细胞样形状（图 3A），GREM1 和 SNAI1 的表达在两组中具有相似的趋势。其中，在对照组中，SNAI1 随着 GREM1 的上调而逐渐上调，RPE65 同时持续保持低表达，同样的，SB431542 组中，SNAI1 具有与 GREM1 类似的低表达而 RPE65 则逐渐上调（图 3B）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]上皮-间充质转化在增生性玻璃体视网膜病变发病机制中的作用[J]. 刘帅,金海鹰. 国际眼科纵览. 2016 (04)
[2]老年性黄斑变性视网膜色素上皮细胞替代治疗研究进展[J]. 沈涵,刘庆淮,袁松涛. 中华眼底病杂志. 2016 (01)
[3]胎儿视网膜色素上皮细胞的原代培养和体外增殖能力的测定[J]. 袁松涛,薛志刚,林卿,刘庆淮,范国平. 中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2014(01)
本文编号：2920777
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