机械敏感离子通道Piezo调控眼压和房水循环的实验研究

发布时间：2020-12-28 02:34

　　青光眼是以特征性视神经萎缩、视野缺损及视力下降为共同特征的眼科疾病。持续性眼压升高是明确的青光眼发病的危险因素之一,因此,控制眼压是青光眼治疗的主要手段。稳定的眼内压主要取决于房水产生与外排速率间的平衡。由内部色素上皮层和外部非色素上皮层组成的睫状体上皮负责房水的产生,小梁网-Schlemm管通路和葡萄膜巩膜通路主要负责房水的外排。但是,由于房水产生和外排调节的复杂性,目前没有有效的方法来治疗升高的眼压。先前的研究表明,TRPV4和TREK-1通道,作为一种重要的机械感压力受器,在小梁网细胞和非色素上皮细胞表达并且在调控房水产生和外排中发挥重要的作用。这提示我们机械敏感性离子通道发挥重要的调节眼压的生理和病理学作用。作为一种新型的机械敏感通道,尽管Piezo通道近年来已被报道在不同组织器官的机械转导和功能维持方面发挥着至关重要的作用。但是Piezo是否在房水产生和外排通路上有明确的表达,以及在调控眼压和房水循环方面发挥怎样的功能目前仍然不清楚。目的:本研究旨在探究机械敏感离子通道Piezo1和Piezo2在房水循环通路的表达,以及Piezo通道对于眼压和房水循环的影响。方法:利用免疫荧... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人源小梁网组织Piezo免疫荧光染色的定量分析

结果12细胞中观察到的Piezo1通道荧光强度要比PE细胞强。在3个供体的组织样品中都证实了Piezo1通道的这种表达模式（图1.3A）。同样的，Piezo2在NPE和PE细胞中均表达，且主要在NPE细胞中表达（图1.3B）。此外，在负责房水葡萄膜巩膜流出通路的睫状肌中我们也观察到了Piezo2通道的明显表达（图1.4）。这些数据表明，Piezo1和Piezo2在睫状体，尤其是负责房水产生的NPE中高表达，Piezo2在睫状肌中明显表达。表明了Piezo在响应外界机械变化进而调节房水产生和葡萄膜巩膜流出通路中可能会发挥重要的作用。图1.3Piezo在人源睫状体非色素上皮细胞中表达睫状体的非色素上皮（NPE）和色素上皮（PE）细胞显示在明场（BF）图像中（左图）。在NPE细胞和PE细胞（尤其是NPE细胞）中均有Piezo1（红色，A右图）和Piezo2（红色，B右图）表达。右图的左下角以较高倍数显示了NPE细胞的染色结果。细胞核用DAPI染成蓝色。比例尺：100μm。PC：后房，NPE：非色素上皮细胞，PE：色素上皮细胞。

青岛大学硕士学位论文13图1.4Piezo2在人源睫状肌中明显表达左图，睫状肌显示在明场（BF）图像中；右图，Piezo2在睫状肌中明显表达。右图左下角以较高倍数显示了睫状肌的染色结果。细胞核用DAPI染成蓝色。比例尺：100μm。PC：后房，CM：睫状迹3.Piezo在小鼠的虹膜角膜角有明显表达我们进一步研究了Piezo通道在小鼠眼睛前节，特别是虹膜角膜角的表达。在我们的研究中通过带有ColIV抗体的IHC来区分小鼠的前房角组织（图1.5A）。用Piezo1和Piezo2抗体进行的IHC研究是在C57BL/6J背景的小鼠中进行的。如图1.5B左图所示，我们可以在整个TM组织、Schlemm管内皮细胞、角膜上皮和内皮细胞、睫状体的上皮细胞中观察到Piezo1和Piezo2的阳性染色（图1.5B左图）。我们通过高放大倍数图像进一步确定了小梁网和Schlemm管的染色结果（图1.5B右图）。另外，我们通过Westernblot进一步确定了小鼠虹膜角膜角中Piezo1和Piezo2的明显表达（图1.6A）。如图1.6B所示，基于Westernblot条带的定量结果显示，Piezo1和Piezo2与β-actin的相对表达分别为2.19±1.30（n=3）和0.726±0.089（n=3）。这些结果表明，Piezo通道可以在小鼠虹膜角膜角中明显表达，暗示了它们在调节小鼠房水循环中的潜在作用。


本文编号：2942971