EBV LMP1\NF-κB\PINX1增强端粒酶活性促进鼻咽癌增殖的机制研究

发布时间：2021-01-04 18:41

　　目的明确端粒酶抑制因子PINX1在鼻咽癌中的表达水平,从突变、DNA甲基化以及转录调控多方面探讨PINX1表达异常的分子机制,并应用细胞功能实验验证新的信号通路。方法应用荧光定量PCR法、免疫组织化学染色法检测及评估PINX1在鼻咽癌组织和正常鼻咽部组织中的表达差异;应用荧光定量PCR法、Western Blot法检测PINX1在鼻咽癌细胞系和永生化鼻咽部上皮细胞系（NP69）、肾上皮细胞系（293T）中的表达差异;应用PCR法测序分析鼻咽癌细胞系中PINX1基因的缺失、插入、突变情况;应用亚硫酸盐测序法（BSP）、甲基化敏感的高分辨率熔解曲线法（MS-HRM）检测鼻咽癌细胞系及NP69的PINX1的甲基化程度;应用去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycitydine,5-aza-2’-dC）处理鼻咽癌细胞系后,荧光定量PCR法检测药物处理前后PINX1 mRNA的表达水平;在鼻咽癌细胞5-8F中过表达EBV潜伏膜蛋白LMP1,应用Western Blot法检测核因子NF-κB及PINX1的蛋白表达变化;应用生物信息学方法预测PINX1启动子区潜在的NF-... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１？丨、＼１在鼻咽癌组织和细胞中的表达

在非癌组织中ＰＩＮＸ１?ｍＲＮＡ的平均表达水平为１．４４±０．８２。相反，在８２．６１?％??（３８／４６）的鼻咽癌组织中可观察到ＰＩＮＸ１蛋白的低表达，在鼻咽癌组织中ＰＩＮＸ１??ｍＲＮＡ的平均表达为０．７３±０．５３?（图１－１Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ）?（ｐ＜０．００１）。以上数据表明，??与鼻咽部上皮组织相比，在鼻咽癌组织中，ＰＩＮＸ１的表达显著减少。??２．ＰＩＮＸ１蛋白和ｍＲＮＡ在鼻咽癌细胞系和ＮＰ６９、２９３Ｔ中的表达??我们进一步应用荧光定量ＰＣＲ法和Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ法分别检测了ＰＩＮＸ１在ＥＢＶ－??和ＥＢＶ＋的鼻咽癌细胞系和ＮＰ６９、２９３Ｔ中的表达水平。我们发现：在鼻咽癌细胞??系中ＰＩＮＸ１?ｍＲＮＡ的平均表达水平比ＮＰ６９降低了７６．９％?（图１－１Ｅ）。在鼻咽癌细??胞系中ＰＩＮＸ１蛋白与ＮＰ６９、２９３Ｔ相比普遍表达减少（图１－１Ｆ，Ｇ）。以上数据表??明，与ＮＰ６９，２９３Ｔ相比，在鼻咽癌细胞中，ＰＩＮＸ１的表达显著减少。??Ａ?ＮＰＣ?ＮＰ?Ｄ?Ｚ?５＂）?Ｅ?■?１．Ｓ－Ｊ??奪變鑛轉纖！３．?Ｂ：?ｉ?，?＾?，??ｋ。心，．１?ｉ。１嚴－嘐－??．．：：１二二：－－气??二?＿＿?ＬａｍｉｎＢ１?｜，?＾????Ｂ?１５１?Ｃ?—?ＮＰＣ?Ｇ?Ｈ｜２〇??５?－ｒ?－ｐ?１〇〇ｌ?１＝１?ＮＰ?＾?＾?Ｓ??ｉｉ〇－?［５?ｓ〇－ｉ?ｎ?１ｉ－５－?＾??１?＿＿?Ｔ?ｆ?ｓ〇－?■???二Ｊ?！??！?５－?■?３?４０－?｜?ＬＭＰ１?—＞?—－?Ｉ?１０＇??１ＪＴ?丄?２：ｉｌ

但是，丨ｔｌ子Ｕ丨要大４的克隆测序，过程繁琐。??根据软件Ｍｅｔｈｙｌ?Ｐｒｉｍｅｒ?１．０杏找ＰＩＮＸ１启动子Ｋ的ＣｐＧ岛，设计ＢＳＰ引物，产??物长为４９２ｂｐ，共包含４３个ＣｐＧ位点（图２－１）。??ＢＳＰ法检测结果显示：鼻咽癌细胞系与ＮＰ６９在ＰＩＮＸ１启动子区的甲基化率极??低（图２－２Ｂ），分别为ＣＮＥ－１：?０％；?ＣＮＥ－２：?０．５％；?ＨＯＮＥ１：?０．５％；?５－８Ｆ：?０．５％；??６－１０Ｂ：?１．９％；?ＮＰ６９：?２．３％。各细胞系甲基化率均低于５％，且鼻咽癌细胞系与??ＮＰ６９中的ＰＩＮＸ１甲基化率未见显著差异。说明鼻咽癌细胞中ＰＩＮＸ１启动子区基本??没有发生甲基化。??３?２??

【参考文献】：
期刊论文
[1]前列腺癌及高级别前列腺上皮内肿瘤8号染色体等位基因杂合性缺失分析[J]. 王照明,黎永祥.  中华男科学. 2004(01)
[2]人类鼻咽癌端粒酶活性的研究及其临床意义[J]. 彭宏,王希军,杨光彩,江肃萍,赵彤.  中华耳鼻咽喉科杂志. 2000(04)



本文编号：2957233