miR-21-5p靶向作用喉癌候选抑瘤基因LCRG1对Hep2细胞生物学性状影响的研究

发布时间：2017-04-10 07:49

  本文关键词：miR-21-5p靶向作用喉癌候选抑瘤基因LCRG1对Hep2细胞生物学性状影响的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]确定mi R-21-5p与LCRG1的作用位点,研究mi R-21-5p通过靶向调控喉癌候选抑瘤基因LCRG1参与喉癌发生发展的作用机制。[方法]前期实验预测发现mi R-21-5p与LCRG1有两个结合位点,根据mi R-21-5p与LCRG1 3’UTR的结合位点来构建其野生型和突变体载体,使相应的mi RNA种子区与LCRG1 3’UTR不能够互补结合,测定LCRG13’UTR荧光素酶的活性,运用突变体实验确定其结合位点;将mi R-21-5p mimic和mi R-21-5p inhibitor瞬转入Hep2细胞,RT-PCR验证mi R-21-5p的表达情况后,利用Western blot实验检测LCRG1蛋白在瞬转后喉癌细胞系Hep2中的表达情况。采用MTT实验、划痕实验、迁移侵袭实验及流式细胞术等实验,观察mi R-21-5p靶向调控LCRG1的表达对Hep2细胞生物学性状的变化。[结果]1.mi R-21-5p与LCRG1 3’UTR的第一个结合位点的野生型能使荧光素酶的活性显著性降低(P0.05),突变体无显著性降低,而第二个结合位点的野生型和突变体均使荧光素酶的活性显著性降低(P0.05),表明第一个结合位点为其结合位点。2.瞬转mi R-21-5p mimic后,RT-PCR检测显示mi R-21-5p的表达明显上调(P0.05),而瞬转mi R-21-5p inhibitor后,mi R-21-5p的表达明显下调(P0.05),说明瞬转成功。3.上调mi R-21-5p可抑制LCRG1蛋白水平的表达,而下调mi R-21-5p可促进LCRG1蛋白水平的表达。Western blot实验检测结果显示:瞬转mi R-21-5p mimic后,mi R-21-5p mimic实验组较mimic NC对照组和Hep2细胞未转染组相比,LCRG1的蛋白水平明显降低(P0.05);而瞬转mi R-21-5p inhibitor后,mi R-21-5p inhibitor实验组较inhibitor NC对照组和Hep2细胞未转染组相比,LCRG1的蛋白水平明显升高(P0.05)。4.上调mi R-21-5p抑制LCRG1的表达使Hep2细胞的增殖、迁移及侵袭能力增强,而下调mi R-21-5p促进LCRG1的表达使Hep2细胞的增殖、迁移及侵袭能力减弱。MTT实验结果显示:瞬转mi R-21-5p mimic后,mi R-21-5p mimic实验组较mimic NC对照组和Hep2细胞未转染组相比,生长速度均明显升高(P0.05),表明上调mi R-21-5p抑制LCRG1的表达使Hep2细胞的增殖能力增强;而瞬转mi R-21-5p inhibitor后,mi R-21-5p inhibitor实验组较inhibitor NC对照组和Hep2细胞未转染组相比,生长速度均明显降低(P0.05),表明下调mi R-21-5p促进LCRG1的表达使Hep2细胞的增殖能力减弱。划痕实验、迁移实验及侵袭实验结果显示:瞬转mi R-21-5p mimic后,mi R-21-5p mimic实验组较mimic NC对照组和Hep2细胞未转染组相比,迁移及侵袭能力均明显升高(P0.05),表明上调mi R-21-5p抑制LCRG1的表达使Hep2细胞的迁移及侵袭能力增强;而瞬转mi R-21-5p inhibitor后,mi R-21-5p inhibitor实验组较inhibitor NC对照组和Hep2细胞未转染组相比,迁移及侵袭能力均明显降低(P0.05),表明下调mi R-21-5p促进LCRG1的表达使Hep2细胞的迁移及侵袭能力减弱。另流式细胞术结果显示:瞬转mi R-21-5p inhibitor后,mi R-21-5p inhibitor实验组较inhibitor NC对照组和Hep2细胞未转染组相比,G1期细胞百分比明显升高,且细胞凋亡率明显增高,表明下调mi R-21-5p促进LCRG1的表达使Hep2细胞的凋亡能力增强,细胞周期主要阻滞于G1期。[结论]在Hep2细胞中mi R-21-5p能抑制喉癌候选抑瘤基因LCRG1的表达,并使Hep2细胞增殖、迁移和侵袭能力均增强。
【关键词】：mi R-21-5p LCRG1 Hep2细胞
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.65
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 主要中英文缩略词表11-12
• 第1章 绪论12-16
• 第2章 实验材料与方法16-32
• 2.1 实验材料16-18
• 2.2 实验方法18-32
• 第3章 实验结果32-44
• 3.1 Luciferase实验32-34
• 3.2 RT-PCR验证miR215p的表达34-35
• 3.3 Western blot检测35-36
• 3.4 MTT实验36-37
• 3.5 划痕实验37-39
• 3.6 迁移实验39-41
• 3.7 侵袭实验41-42
• 3.8 流式实验42-44
• 第4章 讨论44-48
• 第5章 结论48-50
• 参考文献50-54
• 文献综述54-64
• 参考文献60-64
• 攻读学位期间发表的论文64-66
• 本研究课题资助项目66-68
• 致谢68

【共引文献】

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中国博士学位论文全文数据库 前4条

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本文编号：296182