NOX4-ROS通路介导的血视网膜屏障破坏对实验性视网膜脱离中光感受器细胞死亡的作用及机制研究
发布时间：2021-01-14 05:46
目的:血视网膜屏障（blood retinal barrier BRB）类似于血脑屏障（Blood Brain Barrier BBB）,都具有选择通透性。位于视网膜组织和血液之间。对维持视网膜微环境的稳态起着重要作用。大部分视网膜疾病都可以引起BRB的损伤,包括糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞和视网膜脱离等。大量研究表明氧化应激产生过量的活性氧（ROS）会导致细胞的变性和坏死。视网膜血管内皮细胞作为BRB重要组成部分,其ROS的主要来源是4型NADPH氧化酶（NOX4）。所以我们研究NOX4干扰,能否减少ROS的产生,减轻实验性视网膜脱离大鼠BRB的损伤,减少光感受器细胞的坏死,从而保护大鼠视功能。从而为我们视网膜脱离患者视功能的保护提供有效的治疗思路。方法:（1）构建并筛选NOX4干扰重组腺相关病毒2（AAV2）质粒并且包装测定病毒滴度。荧光显微镜下观察AAV2载体转染PC-12细胞系的效率。（2）腺相关病毒载体视网膜下腔注射转染大鼠视网膜,3周后取大鼠视网膜制作冰冻切片,荧光显微镜下观察病毒转染大鼠视网膜情况,每只大鼠右眼做实验组,左眼作为对照组。（3）AAV2载体转染视网膜3周...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
表达GFP绿色荧光的AAV2载体可以在体外有效转染大鼠PC-12细胞系，以上所有图片标尺都是40μm
图 2：以 AAVNC 为校准,NOX4 基因相对于 RGAPDH(内参Figure 2: Histgram of relative expression quantity of NRGAPDH(internal reference), calibrated byAAVNC.如图 2 所示，相对于空白对照和转染了阴性干扰病毒，NOX4-rat-578 、 NOX4-rat-1207 的 细 胞 中 NOX4 基 因 NOX4-rat-1207 的干扰效果做好，所以我们选用 NOX4-rat-1体内实验。最终选择的 NOX4-rat-1207 病毒滴度为 1.12x101病毒滴度为 3.99x1010V.G./ml。大鼠视网膜下腔注射 AAV2 载体转染视网膜，3 周后取冰冻切片，检测病毒转染大鼠视网膜效率。如图 3：
图 3：表达 GFP 绿色荧光的 AAV2 载体视网膜下腔注射，可以在体内有效转染大鼠视网膜组织，视网膜下注射后三周达到最大转染效率，图片标尺为 40μm。Figure 3: Subretinal injection of AAV2 virus vector expressing green fluorescence ofGFP could effectively transfection the retinal tissue of rats in vivo, and the maximumtransfection efficiency was reached three weeks after subretinal injection.scalebar=40μm如图 3 所示，大鼠视网膜下腔注射 AAV2 病毒 3 周后，取大鼠的视网膜组织做冰冻切片，在倒置荧光显微镜下使用蓝光和红光观察 GFP 荧光和 DAPI 染色。可以观察到大部分视网膜可以被病毒有效的转染，光感受器细胞层检测到较强的GFP 荧光表达，余下各层均有表达，较光感受器细胞层少。
本文编号：2976334
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
表达GFP绿色荧光的AAV2载体可以在体外有效转染大鼠PC-12细胞系，以上所有图片标尺都是40μm
图 2：以 AAVNC 为校准,NOX4 基因相对于 RGAPDH(内参Figure 2: Histgram of relative expression quantity of NRGAPDH(internal reference), calibrated byAAVNC.如图 2 所示，相对于空白对照和转染了阴性干扰病毒，NOX4-rat-578 、 NOX4-rat-1207 的 细 胞 中 NOX4 基 因 NOX4-rat-1207 的干扰效果做好，所以我们选用 NOX4-rat-1体内实验。最终选择的 NOX4-rat-1207 病毒滴度为 1.12x101病毒滴度为 3.99x1010V.G./ml。大鼠视网膜下腔注射 AAV2 载体转染视网膜，3 周后取冰冻切片，检测病毒转染大鼠视网膜效率。如图 3：
图 3：表达 GFP 绿色荧光的 AAV2 载体视网膜下腔注射，可以在体内有效转染大鼠视网膜组织，视网膜下注射后三周达到最大转染效率，图片标尺为 40μm。Figure 3: Subretinal injection of AAV2 virus vector expressing green fluorescence ofGFP could effectively transfection the retinal tissue of rats in vivo, and the maximumtransfection efficiency was reached three weeks after subretinal injection.scalebar=40μm如图 3 所示，大鼠视网膜下腔注射 AAV2 病毒 3 周后，取大鼠的视网膜组织做冰冻切片，在倒置荧光显微镜下使用蓝光和红光观察 GFP 荧光和 DAPI 染色。可以观察到大部分视网膜可以被病毒有效的转染，光感受器细胞层检测到较强的GFP 荧光表达，余下各层均有表达，较光感受器细胞层少。
本文编号：2976334
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