肠道真菌菌群失调对小鼠角膜创伤修复的影响

发布时间：2021-01-23 20:25

　　目的:观察抗真菌药物诱导的肠道真菌菌群失调对小鼠角膜创伤修复的影响。方法:选用健康无眼疾的C57BL/6J雄性小鼠,将实验小鼠随机分为两组:对照组和两性霉素B组。对照组给予正常饮食,两性霉素B组给予添加两性霉素B的饮食,以诱导小鼠肠道真菌菌群失调,4wk后对两组小鼠角膜进行上皮创伤,使用荧光素钠染色角膜创伤区域,动态观察上皮修复情况,并利用免疫荧光染色观察角膜上皮细胞、炎症细胞变化,通过HE染色观察角膜厚度的变化。结果:两性霉素B组与对照组相比,再上皮化速度和创伤修复延迟,炎症细胞明显减少,角膜上皮厚度变薄。结论:肠道真菌菌群失调延迟角膜创伤的修复,降低角膜创伤后的炎症反应。 

【文章来源】：国际眼科杂志. 2019,19(05)北大核心

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【部分图文】：

角膜分区模式示意图(1区为角膜缘区，5区为角膜中央区)

图2两组小鼠肠道真菌菌群在门、纲水平上的构成A:门水平;B:纲水平(不同颜色表示不同菌群)。表1Alpha多样性分析n=5组别AceChao1ShannonSimpsongoods_coverageCtrl组94.87±8.36100.71±14.675.17±0.390.92±0.011.00±0.00Amph组99.30±12.58100.50±12.754.12±0.840.93±0.021.00±0.00Z－0.52－0.31－2.41－0.730.00P0.600.750.020.471.00注:Ctrl组:对照组;Amph组:两性霉素B组。表2两组小鼠创伤后不同时间点分裂细胞计数(x珋±s，个/视野)组别0h6h12h18h24h30h36hCtrl组12.67±4.1924.17±8.6853.25±10.29112.58±25.14219.58±58.02209.92±29.42256.42±25.25Amph组7.08±2.7511.17±5.0442.58±10.2658.75±10.45141.25±28.40109.58±25.93133.92±46.83t3.864.482.546.854.208.867.98P0.001＜0.010.019＜0.01＜0.01＜0.01＜0.01注:Ctrl组:对照组;Amph组:两性霉素B组。的γδT细胞。单光子共聚焦显微镜断层扫描角膜两条直径上第4区FITC/Gr－1标记的嗜中性粒细胞，然后使用Imaris7.2.1软件进行定量统计。1.2.7角膜上皮厚度测量两组分别于创伤后24、48、96h各处死3只小鼠，取下完整小鼠眼球，经固定、脱水浸蜡、包埋、切片、脱蜡等过程，制作石蜡切片并进行HE染色，在显微镜10倍物镜下拍摄图像并使用ImageJ软件进行角膜厚度定量计算。统计学分析:使用SPSS21.0统计软件分析数据。各组数据用x珋±s表示，分裂细胞、中性粒细胞、γδT细胞和角膜厚度各时间点组间差异比较采用独立样本t检验。菌群多样性和结构分析采用秩和检验Mann－WhitneyU检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。2结果2.1两性霉素B诱导后小鼠肠道真菌菌群发生改变小鼠粪便样本ITSrDNA测序结果显示:两性霉素B处理4wk后，小鼠肠道真菌菌群多

图3两组小鼠角膜创伤修复的动态变化A:创伤后不同时间点荧光素钠染色显示创伤面积;B:创伤后各时间点两组的角膜创伤面积占创伤原始面积百分比(aP＜0.05，bP＜0.01vsCtrl组)。图4两组小鼠创伤后48h角膜HE染色和上皮层厚度定量A:创伤后48h角膜上皮组织形态变化(×100);B:创伤后48h角膜上皮厚度定量计算(bP＜0.001vsCtrl组)。表3两组小鼠创伤后不同时间点γδT细胞计数(x珋±s，个/视野)组别0h6h12h18h24h30h36hCtrl组105.17±13.08106.5±21.13104.67±21.91123.50±28.08196.83±44.65158±27.9662.25±14.28Amph组82.42±27.6682.75±17.8385.33±21.0699.17±24.71144.25±15.8989.08±10.8749.33±17.21t2.582.982.202.253.847.962.00P0.0210.0070.0380.0350.002＜0.010.058注:Ctrl组:对照组;Amph组:两性霉素B组。表4两组小鼠创伤后不同时间点中性粒细胞计数(x珋±s，个/视野)组别6h12h18h24h30h36hCtrl组87.33±28.25204.33±38.87273.83±18.74348.17±85.95273.50±52.59234.67±39.03Amph组56.50±29.28188.67±43.04223.17±44.35236.17±30.32165.33±59.45137.50±48.44t1.860.662.583.013.343.83P0.0930.5230.0380.0230.0080.003注:Ctrl组:对照组;Amph组:两性霉素B组。2.3肠道真菌菌群失调对小鼠角膜炎症细胞的影响通过观察创伤后炎症细胞的数量变化，说明肠道真菌菌群失调对炎症反应的影响。两组γδT和中性粒细胞数量在创伤后均明显增加，但是与Ctrl组相比，Amph组角膜两条径线上γδT细胞数量显著下降(表3)，中性粒细胞数量也明显降低(表4)。结果表明，肠道真菌菌群失调小鼠创伤后炎症反应降低，炎症细胞数量明显减少。2.4肠道真菌菌群失调对创伤修复后角膜厚度的影响Amph组小鼠角膜创伤后上皮厚?


本文编号：2995869