小鼠及人神经祖细胞来源外泌体治疗视网膜变性的作用及其机制研究

发布时间：2021-02-08 20:09

　　研究背景视网膜变性（retinal degeneration,RD）是一类视网膜退行性致盲性疾病。干细胞移植被认为是治疗RD最有潜力的治疗方案之一,但其治疗机制尚不明确。国内外的研究和我们课题组前期研究都证实视网膜神经祖细胞（neural progenitor cells,NPCs）在移植后能分化为成熟感光细胞替代变性的视网膜细胞并与宿主视网膜整合。近来发现参与分化整合的NPCs数量非常少,故推测细胞替代机制可能不是NPCs发挥治疗作用的主要机制。多个课题组的研究发现,移植的NPC和宿主细胞之间的物质交换可能是延缓宿主细胞变性进程的主要机制。NPC能分泌多种神经营养因子,以及包括外泌体在内的各类细胞外囊泡（Extracellular vesicles,EVs）,以便和微环境中各类细胞进行调控和交流。外泌体（exosomes）属于细胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs）的一种。多项研究报道它可以介导移植干细胞和宿主细胞间的细胞间通讯,NPC来源外泌体（NPC-exos）对损伤的中枢神经系统具有神经保护作用。尚无研究探讨NPC-exos是否参与介导了NPCs在RD... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：125 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

悬浮生长的小鼠神经祖细胞克隆球状态A:第0代接种后第2天;B:原代接种后第7天;C:第1代传代后第1天;D:第1代传代后第4天;E:第2代传代后第4天;F:第8代传代后第7 天。标尺:100μm。

图1-1悬浮生长的小鼠神经祖细胞克隆球状态A:第0代接种后第2天;B:原代接种后第7天;C:第1代传代后第1天;D:第1代传代后第4天;E:第2代传代后第4天;F:第8代传代后第7 天。标尺:100μm。2.3.1.2人胚胎视网膜神经祖细胞的原代培养及鉴定

本研究通过免疫荧光技术及流式细胞检测技术对培养至第4代的h NPC进行鉴定。结果显示,h NPC培养至在第4代时表达Nestin(图1-4A)、PAX6(图1-4B)、SOX2(图1-4C)神经干细胞标记;不表达感光细胞标记Recoverin(图1-4D),不表达Müller细胞标记GS(图1-4E)和GFAP(图1-4F)。同时,流式检测结果显示,培养至第4代的h NPC高表达Nestin(图1-4G)、PAX6(图1-4H)、SOX2(图1-4I)神经干细胞指标。结果提示:通过此种方法能成功获得h NPC,可作为后续提取h NPC-exos的来源。图1-4人胚胎视网膜神经祖细胞(第4代)的鉴定A-C:hNPC表达Nestin、PAX6和SOX2(C);D-F:hNPC不表达感光细胞标记Recoverin、Müller细胞标记GS和GFAP。G-I:hNPC通过流式细胞术检测诱神经干细胞标记Nestin、PAX6和SOX2。标尺:50μm(A-F)。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Micro RNA-9 promotes the neuronal differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells by activating autophagy[J]. Guang-yu Zhang,Jun Wang,Yan-jie Jia,Rui Han,Ping Li,Deng-na Zhu.  Neural Regeneration Research. 2015(02)
[2]Molecular hydrogen regulates the expression of miR-9,miR-21 and miR-199 in LPS-activated retinal microglia cells[J]. Guo-Dan Liu,Hong Zhang,Lin Wang,Qing Han,Shi-Feng Zhou,Ping Liu.  International Journal of Ophthalmology（English Edition）. 2013(03)



本文编号：3024465