Gαi介导MYDGF（骨髓源性生长因子）信号转导促血管新生作用的研究

发布时间：2021-02-20 14:40

　　多种眼部疾病的重要的致病原因为眼内病理性新生血管生成,抑制病理性新生血管生成是一个有效的治疗眼部诸多病理性新生血管性疾病的方法。与血管生成关系密切的细胞生长因子例如血管内皮生长因子（VEGF）、表皮生长因子（EGF）等都有促进血管内皮细胞增殖并促进病理性新生血管进展的作用。寻找途径抑制这些生长因子的作用就可以在一定程度上有效地减缓病理性新生血管的发展。我们课题组以往的研究结果发现,Gαi蛋白在血管内皮生长因子（VEGF）、表皮生长因子（EGF）等细胞因子活化下游AKT-mTOR和MAPK/ERK等信号通路中发挥重要作用。MYDGF是骨髓源性的血管生长因子,既往研究已经证实其在机体各组织器官中都有不同程度的表达,并且有较强的促进血管内皮细胞增殖和存活的作用,本课题主要探讨Gαi是否在MYDGF介导的新生血管形成过程中发挥着重要作用,希望能为治疗眼内病理性新生血管性疾病提供一个新的思路。研究目的?解析Gαi介导MYDGF信号转导的分子机制;?明确MYDGF及Gαi表达量对于血管生成的作用。研究方法?培养野生型小鼠胚胎成纤维细胞（WT-MEFs）,Gαi1和Gαi3双敲除的小鼠胚胎成纤维细胞... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

在MEFs中，双敲Gαi1和Gαi3蛋白会导致MYDGF介导的下游AKT-mTOR及MAPK/ERK信号通路活化水平明显降低甚至缺失

南京医科大学硕士学位论文组相比，用 MYDGF 处理单一敲除 Gαi1 的 MEFs（Gαi1KO-MEFs）或单一敲除Gαi3 的 MEFs（Gαi3KO-MEFs）后 AKT-mTOR 和 MAPK/ERK 信号通路中的标志性蛋白（即 Akt、Gsk3α3β、S6、S6K、Erk）的磷酸化水平均出现不同程度降低。而双敲 Gαi1 和 Gαi3 的 MEFs（DKO-MEFs）组的上述标志性蛋白的磷酸化水平明显降低并出现部分缺失表现，在与之前的实验结果是一致的。实验结果表明：在 MEFs 中，单一敲除 Gαi1 或 Gαi3 蛋白可以部分抑制MYDGF 介导的下游 AKT-mTOR 及 MAPK/ERK 通路的活化。

MAPK/ERK 信号通路中发挥何种作用，我们利用野生型小鼠胚胎成纤维细胞（WT-MEFs）和敲除 WT-MEFs 中的 Gαi2 蛋白而获得的 Gαi2KO-MEFs 细胞株作为细胞模型以进行接下来的实验。用指定浓度（25ng/ml）的 MYDGF 处理上述两种细胞不同时长（0、5、10、20 min），收集处理后的细胞蛋白，运用 WesternBlot 法检测在不同作用时间下， 25 ng/ml 的 MYDGF 对于 WT-MEFs 和Gαi2KO-MEFs 中 AKT-mTOR 和 MAPK/ERK 信号通路活化相关的标志性蛋白（Akt-S473、S6、Erk）的磷酸化水平以明确 Gαi2 蛋白在 MYDGF 介导的AKT-mTOR 和 MAPK/ERK 信号通路活化中的作用。实验结果显示：相对于对照组（WT-MEFs），Gαi2 蛋白敲除的小鼠胚胎成纤维细胞实验组中 p- Akt-S473、p- S6 和 p- Erk 的水平并未见明显波动。实验结果表明：在 MEFs 中，单一敲除 Gαi2 蛋白对 MYDGF 介导的下游AKT-mTOR 及 MAPK/ERK 信号通路活化没有明显影响。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of stromal cell-derived factor 1α pathway in bone metastatic prostate cancer[J]. Nisha Gupta,Dan G.Duda.  The Journal of Biomedical Research. 2016(03)



本文编号：3042914