siRNA干扰PECAM-1对人鼻咽鳞癌辐射耐药细胞CNE1/R中MDR-1表达的影响

发布时间：2021-02-21 18:30

　　目的X射线照射肿瘤细胞后能否引起其产生多药耐药性（multidrug resistance,MDR）,以及寻找相关的关键分子并探明其作用机制是国内外研究的热点和重点。我们前期实验研究发现人类血小板内皮细胞黏附因子-1（platelet endothelial cell adhesion molecule-1, PEC AM-1）与X射线辐射诱导的人鼻咽鳞癌耐药细胞CNE1/R中MDR的形成相关。我们通过稳定干扰CNE1/R中PECAM-1的表达,检测干扰后MDR-1表达水平的变化,探讨PECAM-1和MDR-1的关系。方法采用RNA干扰（RNA interference, RNAi）技术,设计PEC AM-1的siRNA片段,克隆至质粒pSilencer2.1中,构建重组质粒pSilencer2.1-PECAM-1;采用脂质体转染法将空质粒pSilencer2.1和重组质粒pSilencer2.1-PECAM-1分别转染入CNE1/R中,分别为对照组和实验组；采用G418筛选转染细胞,挑取细胞单克隆扩大培养,从而获得单克隆细胞系PSilencer2.1/CNE1/R和pSilencer... 

【文章来源】：大连大学辽宁省

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一部分 重组质粒pSilencer2.1-PECAM-1的构建及细胞转染
    1 实验材料和方法
        1.1 实验材料
        1.2 重组质粒的构建
            1.2.1 PECAM-1的siRNA序列的设计与合成
            1.2.2 PECAM-1的siRNA片段克隆至pSilencer2.1载体
            1.2.3 重组质粒pSilencer2.1-PECAM-1的大量提取及纯化
        1.3 细胞转染
            1.3.1 细胞的复苏与培养
            1.3.2 细胞转染
            1.3.3 G418筛选单克隆细胞
    2 实验结果
第二部分 稳定干扰CNE1/R中PECAM-1后其表达的检测
    1 实验材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 干扰PECAM-1后Real Time PCR检测其表达
            1.2.1 细胞RNA的提取与质量检测
            1.2.2 逆转录反应
            1.2.3 Real Time PCR反应
        1.3 干扰PECAM-1后Western blot检测其表达
            1.3.1 细胞总蛋白的提取和定量
            1.3.2 Western blot
    2 实验结果
第三部分 干扰CNE1/R中PECAM-1后检测MDR-1表达
    1 实验材料和方法
        1.1 实验材料
        1.2 干扰PECAM-1后Real time PCR检测MDR-1表达
            1.2.1 细胞RNA的提取与质量检测
            1.2.2 逆转录反应
            1.2.3 Real Time PCR反应
        1.3 干扰PECAM-1后Western blot检测MDR-1表达
            1.3.1 细胞总蛋白的提取和定量
            1.3.2 Western blot
    2 实验结果
讨论
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3044748