MicroRNA-129-5p及UHRF1对视网膜母细胞瘤的作用及机制研究

发布时间：2021-04-19 14:01

　　视网膜母细胞瘤（RB）是儿童中最常见的原发性眼内恶性肿瘤。越来越多的证据表明在RB中微小RNA（miRNA）通过作用于致癌基因或肿瘤抑制基因来调节信号分子。因此,在我们的研究中,我们旨在通过靶向PAX6来研究miR-129-5p在RB细胞中PI3K/AKT信号传导途径的功能。在我们的研究中选择了两种RB细胞系Y79和WERI-Rb-1,然后通过转染miR-129-5p抑制剂或si-PAX6来探索miR-129-5p在RB细胞增殖,侵袭和迁移的调节作用。双荧光素酶测定分析用于检测miR-129-5p和PAX6之间的靶向关系。此外,Western印迹分析用于检测细胞周期相关因子（CDK2和细胞周期蛋白E）和PI3K/AKT信号通路相关因子（p-AKT和AKT）的表达。裸鼠肿瘤发生实验用于评估miR-129a-5p对体内RB生长的影响。miR-129-5p在RB细胞系中下调。miR-129-5p直接靶向PAX6的3’-非翻译区。人工下调miR-129-5p促进RB细胞系Y79和WERI-Rb-1的细胞增殖、迁移和侵袭,并通过PI3K/AKT信号通路促进体内RB生长,可通过转染沉默的PAX6进... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：124 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
abstract
中英文缩略表
前言
第1章 视网膜母细胞瘤综述
    1.1 流行病学研究
    1.2 生物学概述
    1.3 预防、早期检测和遗传
    1.4 临床表现、患者评估和分期
    1.5 治疗原则及治疗方法
        1.5.1 手术
        1.5.2 焦点疗法
        1.5.3 化疗
        1.5.4 放射治疗
        1.5.5 眼内视网膜母细胞瘤的治疗
        1.5.6 玻璃体内和动脉内化疗
        1.5.7 眼外视网膜母细胞瘤治疗
        1.5.8 视网膜母细胞瘤的长期疗效及治疗
    1.6 miR-129-5p基因
    1.7 UHRF1 基因
    1.8 PAX6 基因
        1.8.1 PAX6 基因功能
        1.8.2 物种分布
        1.8.3 PAX6 亚型
        1.8.4 临床意义
        1.8.5 突变
    1.9 PI3K/AKT信号通路
        1.9.1 AKT信号传导的简史
        1.9.2 PI3K/AKT途径的组成
        1.9.3 PI3K/AKT信号传导的调节
        1.9.4 PI3K/AKT信号传导的下游
        1.9.5 与肿瘤发生的关系
第2章 MicroRNA-129-5p通过靶向PAX6的PI3K/AKT信号通路抑制视网膜母细胞瘤细胞的增殖、迁移和侵袭
    2.1 研究背景
    2.2 试剂及设备
        2.2.1 主要试剂
        2.2.2 自配试剂
        2.2.3 主要仪器设备
    2.3 材料和方法
        2.3.1 细胞培养和分组
        2.3.2 稳定细胞株的构建
        2.3.3 RNA分离和定量
        2.3.4 蛋白质印迹分析
        2.3.5 3 -（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四氮唑溴化（MTT）分析
        2.3.6 5 -溴-2'-脱氧尿苷（BrdU）掺入测定
        2.3.7 流式细胞仪术分析细胞周期
        2.3.8 Transwell测定
        2.3.9 双荧光素酶报告基因测定
        2.3.10 动物成瘤实验
        2.3.11 免疫组化染色
        2.3.12 统计分析
    2.4 结果
        2.4.1 miR-129-5p在 RB细胞中低表达
        2.4.2 PAX6是miR-129-5p的靶基因之一
        2.4.3 miR-129-5p通过抑制PAX6 的表达抑制RB细胞的增殖
        2.4.4 miR-129-5p通过PAX6 影响RB细胞周期
        2.4.5 下调miR-129-5p通过PAX6 促进RB细胞的侵袭和迁移
        2.4.6 miR-129-5p通过PAX6 调节PI3K/AKT信号通路来控制RB细胞增殖、迁移和侵袭
        2.4.7 下调的miR-129-5p促进体内RB肿瘤生长
    2.5 讨论
第3章 沉默UHRF1 通过PI3K/Akt信号通路抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖并促进细胞凋亡
    3.1 研究背景
    3.2 材料和方法
        3.2.1 重组慢病毒载体质粒的转染和筛选
            3.2.1.1 质粒的转化
            3.2.1.2 质粒的提取
            3.2.1.3 乙醇沉淀法提纯质粒
        3.2.2 细胞转染和分组
        3.2.3 RNA提取和逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）
        3.2.4 3 - [4,5-二甲基噻唑-2-YI] -2,5-二苯基四唑溴化物（MTT）测定
        3.2.5 5 -乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）掺入测定
        3.2.6 流式细胞术
        3.2.7 蛋白质印迹分析
        3.2.8 肿瘤异种移植实验
        3.2.9 统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 慢病毒感染效率的测定
        3.3.2 UHRF1-shRNA感染对含有UHRF1的mRNA和蛋白表达的影响
        3.3.3 沉默UHRF1 抑制WERI-Rb-1 细胞的增殖
        3.3.4 沉默UHRF1 促进WERI-Rb-1 细胞凋亡
        3.3.5 沉默UHRF1 抑制WERI-Rb-1 细胞中PI3K/Akt信号通路的表达
    3.4 讨论
结论
参考文献
导师简介
作者简介
攻读博士期间所发论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Suppressive effect of microRNA-143 in retinoblastoma[J]. Li-Lun Wang,Hai-Feng Hu,Yan-Qin Feng.  International Journal of Ophthalmology. 2016(11)
[2]miR-129在乳腺癌中表达下调及其对乳腺癌细胞迁移运动的影响[J]. 王球玉,唐珺,周佽想,赵倩.  生理学报. 2012(04)
[3]Epidemiology and Rb 1 gene of retinoblastoma[J]. Jun Yun 1,Yang Li 2,Chang-Tai Xu 3,Bo-Rong Pan 4 1 Department of General Surgery,Xijing Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shaanxi Province,China 2 Department of Anesthesiology,Xijing Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shaanxi Province,China 3 Department of Anatomy and Editorial Office of Chinese Journal of Neuroanatomy,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shaanxi Province,China 4 Outpatient Department of Oncology,Institute of Tumour,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,Shaanxi Province,China.  International Journal of Ophthalmology（English Edition）. 2011(01)



本文编号：3147690