白藜芦醇对线粒体氧化应激介导的视网膜损伤的保护机制及作用研究

发布时间：2021-04-26 03:27

　　研究背景视网膜退行性疾病如年龄相关性黄斑变性（AMD）和视网膜色素变性（RP）可导致视力损害并最终不可逆性失明。视网膜缺血和光损伤被认为是这类疾病的两大主要原因。光感受器细胞死亡是视网膜退行性病变的基本病理特征。引起视网膜退行性疾病的机制可能是复杂的,涉及多种遗传和环境因素。目前虽然已经发现了数百种致病基因突变,但导致光感受器死亡的确切分子途径尚不完全清楚。由于视网膜的高氧耗和光敏性,视网膜特别容易发生氧化应激。线粒体对氧化应激具有一定的调节能力,但是当活性氧（ROS）超过细胞的抗氧化防御能力时,会启动程序性细胞死亡,即凋亡。caspase依赖途径是经典的凋亡途径,即活化一系列半胱氨酸蛋白水解酶,其可通过线粒体介导的内源性途径激活,也可通过受体介导的外源性途径激活。除了经典的caspase依赖途径,Parthanatos是一种独特的、高度编排的细胞死亡形式,它通过核酶PARP-1的过度激活而发生。Parthanatos不需要caspases来执行,而是依赖于PARP-1介导的PAR的积累以及随后凋亡诱导因子（AIF）的核易位,导致细胞死亡。白藜芦醇（RSV）是一种多酚类化合物,在许多植... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：111 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 视网膜退行性疾病
        1.1.1 概述
        1.1.2 治疗方法
    1.2 白藜芦醇
        1.2.1 概述
        1.2.2 药理作用
        1.2.3 在眼科疾病中的作用
        1.2.4 目前的局限性和未来前景
第2章 白藜芦醇在葡萄糖剥夺和光损伤条件下对视网膜感光细胞的影响
    2.1 实验材料
        2.1.1 视网膜感光细胞（661W）
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器与耗材
        2.1.4 常用溶液配制
    2.2 实验方法与步骤
        2.2.1 661W的常规培养
        2.2.2 实验分组
        2.2.3 MTT检测
        2.2.4 细胞阻抗检测
        2.2.5 PI/Hoechst染色
        2.2.6 结果数据统计
    2.3 实验结果
        2.3.1 RSV的计量-反应曲线
        2.3.2 实时细胞阻抗监测不同浓度RSV在两种不同损伤条件下对661 W的细胞活性情况的影响
        2.3.3 RSV在两种不同损伤条件下对细胞凋亡情况的影响
    2.4 讨论
第3章 白藜芦醇在葡萄糖剥夺和光损伤条件下对氧化应激及线粒体的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 视网膜感光细胞（661W）
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器与耗材
        3.1.4 常规溶液配制
    3.2 实验方法与步骤
        3.2.1 661W的常规培养
        3.2.2 实验分组
        3.2.3 活性氧（ROS）检测
        3.2.4 还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽（GSH/ GSSG）的测定
        3.2.5 Western blot法检测661 W在葡萄糖剥夺和光照条件下RSV对 HO-1 蛋白表达水平的影响
        3.2.6 线粒体绿色荧光染色
        3.2.7 线粒体膜电位检测
        3.2.8 结果数据统计
    3.3 实验结果
        3.3.1 RSV在两种不同损伤条件下对细胞内活性氧的影响
        3.3.2 RSV在两种不同损伤条件下对还原型谷胱甘肽的影响
        3.3.3 Western blot法检测RSV在两种损伤条件下对HO-1 蛋白表达水平的影响
        3.3.4 RSV在两种不同损伤条件下对线粒体形态的影响
        3.3.5 RSV在两种不同损伤条件下对线粒体膜电位的影响
    3.4 讨论
第4章 白藜芦醇在葡萄糖剥夺和光损伤条件下对SIRT1 的影响
    4.1 实验材料
        4.1.1 视网膜感光细胞（661W）
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器与耗材
        4.1.4 常规溶液配制
    4.2 实验方法与步骤
        4.2.1 661W的常规培养
        4.2.2 实验分组
        4.2.3 PI/Hoechst染色
        4.2.4 Western blot法检测661 W在葡萄糖剥夺和光照条件下RSV对 Sirt1 蛋白表达水平的影响
        4.2.5 SIRT活性检测
        4.2.6 结果数据统计
    4.3 实验结果
        4.3.1 SIRT1 抑制剂在两种不同损伤条件下对细胞凋亡的影响
        4.3.2 Western blot法检测RSV在两种损伤条件下对SIRT1 蛋白表达水平的影响
        4.3.3 RSV在两种损伤条件下对SIRT1 酶活性的影响
    4.4 讨论
第5章 白藜芦醇对葡萄糖剥夺和光损伤诱导的细胞死亡的保护机制..
    5.1 实验材料
        5.1.1 视网膜感光细胞（661W）
        5.1.2 293T细胞
        5.1.3 主要试剂
        5.1.4 主要仪器与耗材
        5.1.5 常用溶液配制
    5.2 实验方法与步骤
        5.2.1 shPARP-1 慢病毒质粒的扩增
        5.2.2 慢病毒载体包装
        5.2.3 收集毒液
        5.2.4 慢病毒感染661 W
        5.2.5 PI/Hoechst染色
        5.2.6 Western blot法检测661 W在葡萄糖剥夺或光照条件下RSV对caspase-3、caspase-9、AIF、PARP-1 蛋白表达水平的影响
        5.2.7 结果数据统计
    5.3 实验结果
        5.3.1 caspase抑制剂在两种损伤条件下对细胞凋亡的影响
        5.3.2 Western Blot法检测RSV在两种损伤条件下对caspase-3,caspase-9 蛋白表达水平的影响
        5.3.3 Western Blot法检测sh-PARP慢病毒感染661 W后对PARP-1 蛋白表达水平的影响
        5.3.4 PARP-1 在两种不同损伤条件下对细胞凋亡的影响
        5.3.5 Western Blot法检测在两种不同损伤条件下对AIF,PARP-1 蛋白表达水平的影响
    5.4 讨论
第6章 白藜芦醇在光损伤条件下对小鼠视网膜的影响
    6.1 实验材料
        6.1.1 实验动物
        6.1.2 主要试剂
        6.1.3 主要仪器与耗材
        6.1.4 常用溶液配制
    6.2 实验方法与步骤
        6.2.1 BALB/c57 小鼠的饲养
        6.2.2 实验分组
        6.2.3 ERG检测
        6.2.4 小鼠视网膜组织的HE染色
        6.2.5 Western blot法检测各组小鼠视网膜中AIF和 PARP-1的蛋白表达水平
        6.2.6 结果数据统计
    6.3 实验结果
        6.3.1 RSV在光损伤条件下对视网膜功能的影响
        6.3.2 RSV在光损伤条件下对视网膜结构的影响
        6.3.3 Western blot法检测RSV在光损伤条件下对AIF和 PARP-1 蛋白表达水平的影响
    6.4 讨论
第7章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3160639