RhoC/Rock通路对Hep-2细胞侵袭迁移能力调控作用的体外实验研究

发布时间：2021-06-23 13:01

　　目的：经过ROCK抑制剂Y-27632处理Hep-2细胞后，探讨RhoC/ROCK信号转导途径对Hep-2细胞的作用机制及生物学影响。方法：（1）使用免疫荧光染色， Western blot及RT-PCR方法，检测经过Y-27632处理前后RhoC、ROCK的蛋白及mRNA表达变化；（2）使用显微镜观察Hep-2细胞形态，Transwell法检测Hep-2细胞体外侵袭、迁移能力变化，MTT法检测细胞体外增殖能力的变化，从宏观水平研究Y-27632对喉癌细胞生物学行为影响。结果：Y-27632可有效下调hep-2细胞中RhoC、ROCK-1及ROCK-2蛋白及mRNA的表达。Y-27632能显著抑制Hep-2细胞的侵袭、迁移。不同浓度的该抑制剂对Hep-2细胞的增殖能力有不同程度的影响。结论：RhoC/ROCK在Hep-2细胞的迁移和侵袭中起到了重要作用，Y-27632能显著抑制Hep-2细胞的侵袭、迁移和增殖能力。 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ROCK-1在hep-2细胞中的表达A：未加抑制剂hep-2中ROCK-1免疫荧光染色

1.2，1.3 所示，经过 Y-27632 抑制后，hep-2 细胞的形态及数量发生了变化；未处理的细胞呈梭形，细胞铺展良好，数量多；处理后的细胞变圆，铺展性差，数量变少。图 1.1 ROCK-1 在 hep-2 细胞中的表达A：未加抑制剂 hep-2 中 ROCK-1 免疫荧光染色B：加抑制剂 Y-27632 后 hep-2 中 ROCK-1 免疫荧光染色图 1.1 中，ROCK-1 在 hep-2 细胞中表达表现为红色荧光，蓝色荧光为染色的细胞核，对比图A和图 B可以发现，红色荧光在 B图中明显减少，由此可知 Y-27632可抑制 ROCK-1 在 hep-2 细胞中表达。

、RT-PCR 结果采 用 RT-PCR 法 检 测 加 抑 制 剂 前 后 hep-2 细 胞 中 RhoC_mRNA CK-1_mRNA 及 ROCK-2_mRNA 表达的变化，结果表明经过抑制剂 Y-27632 的药物组与对照组相比，RhoC_mRNA、ROCK-1_mRNA 及 ROCK-2_mRNA 明显降低，由此可知 Y-27632 可有效抑制 Hep-2 细胞中 RhoC_mRNACK-1_mRNA 及 ROCK-2_mRNA 表达。以下结果均经统计学分析 P<0.05。详 1.4、1.5、1.6（注意图中 1 为未经处理的 hep-2，2 为加抑制剂后的 hep-2）。图 1.3 RhoC 加抑制剂前后免疫荧光比较A：未加抑制剂中 RhoC 免疫荧光染色B：加抑制剂 Y-27632 后 RhoC 免疫荧光染

【参考文献】：
期刊论文
[1]RhoC及其效应分子ROCK2在人喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义[J]. 张俊波,石怀银,刘良发.  医学研究杂志. 2011(12)
[2]RhoC基因转染对胆管癌QBC 939细胞生物学行为的影响[J]. 陈明流,石铮,何庆良.  福建医药杂志. 2009(01)
[3]RhoC及其调节因子RhoGDIβ、RhoGDIγ在肺鳞癌、腺癌中的表达及临床意义[J]. 刘东明,许月新,官忠燕,段鸿梅,王恩华,韩昱晨.  中国肺癌杂志. 2008(04)
[4]RhoC-siRNA表达载体对肝癌细胞生长速度及侵袭力的影响[J]. 郑文建,梁平,赵弘智.  第三军医大学学报. 2007(18)



本文编号：3244985