急性缺氧对SD乳鼠耳蜗螺旋神经节神经元钾电流的影响

发布时间：2017-04-25 09:15

  本文关键词：急性缺氧对SD乳鼠耳蜗螺旋神经节神经元钾电流的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究急性缺氧(acute hypoxia)对短期分离培养的SD乳鼠耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGNs)钾通道电流的影响。从听觉神经元信息传递功能变化的角度,为缺氧性内耳损害导致听觉障碍提供进一步的理论依据。方法:(1)短期分离培养SD乳鼠SGNs并鉴定。(2)应用全细胞膜片钳技术观察急性缺氧对SGNs外向电流的作用。(3)分别应用不同的通道阻断剂TEA和4-AP观察急性缺氧对SGNs外向电流的影响。(4)应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测急性缺氧时与钾通道相关的胞内第二信使c AMP和c GMP水平的变化。结果:(1)酶解分离可获得生存状态良好的神经元,经免疫荧光鉴定为SGNs。(2)SGNs外向电流为电压门控外向整流电流,主要包括对TEA敏感的大电导钙激活钾通道(Large conductance Ca2+-activated K+channe,BKCa)电流和对4-AP敏感的电压依赖性钾离子通道(Voltage-gated K+channels,KV)电流。(3)当钳制电压在-60m V时,急性缺氧电压依赖性地增强SGNs外向电流,主要增强0~+60 m V电压区间的激活电流幅度。缺氧致5min时,外向电流幅度增强最大,+60m V电流幅度与对照组基础电流相比由(971.23±50.25)p A增加到(2361±207.4)p A(n=6,P0.01)。缺氧5-10min时,增强幅度呈下降趋势。缺氧11-15min对外向电流的增强作用基本消失,与正常对照组相比无统计学差异(n=6,P0.05)。(4)背景灌流TEA(1 mmol/L),缺氧引起的SGNs外向电流增强作用明显降低,灌流4-AP(1 mmol/L)后,对缺氧引起的SGNs外向电流的增强无明显作用。(5)分别检测缺氧5 min,15 min,20 min后SGNs中c AMP和c GMP的含量变化。缺氧5 min组与正常对照组相比,c AMP浓度明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。缺氧15 min组与正常对照组相比,c AMP浓度变化无统计学差异(P0.05);缺氧20 min组与正常组相比,c AMP水平下降(P0.01)。c GMP浓度随着缺氧时间的延长,总体呈下降趋势(P0.01),但在20 min后有部分回升(P0.01,缺氧15 min vs缺氧20 min)。结论:SD乳鼠SGNs急性缺氧可能通过激活大电导钙激活钾通道(BKCa),增强K+外向电流,使神经元膜电位超极化,细胞兴奋性降低,从而影响SGNs传导功能。该变化可能与细胞内第二信使c AMP和c GMP相关。
【关键词】：急性缺氧 SGN 大电导钙激活钾通道 cAMP cGMP
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R764.4
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-11
• 材料和方法11-18
• 1 材料11-13
• 1.1 实验动物11
• 1.2 主要实验试剂、耗材11-12
• 1.3 主要实验仪器12-13
• 2 方法13-18
• 2.1 SGNs 的分离与原代培养13
• 2.2 SGNs免疫荧光鉴定13-14
• 2.3 溶液及主要实验药品的配置14-15
• 2.4 玻璃微电极制备15
• 2.5 细胞急性缺氧模型的制备15
• 2.6 全细胞膜片钳记录技术15-16
• 2.7 酶联免疫吸附实验检测16-17
• 2.8 统计学方法17-18
• 结果18-28
• 1 SGNs培养与免疫荧光鉴定结果18-20
• 1.1 SGNs 的培养18
• 1.2 SGNs 的免疫荧光鉴定18-20
• 2 全细胞膜片钳实验结果20-26
• 2.1 SGNs外向电流的主要成分20-22
• 2.2 缺氧时程对SGNs外向电流的影响22-23
• 2.3 四乙胺（TEA）阻断缺氧增强的外向电流23-25
• 2.4 氨基吡啶（4-AP）对缺氧增强的外向电流无明显作用25-26
• 3 ELISA检测缺氧不同时间胞内cAMP和cGMP的含量变化实验结果26-28
• 3.1 胞内第二信使cAMP浓度随缺氧时间的变化26
• 3.2 胞内第二信使cGMP浓度随缺氧时间的变化26-28
• 讨论28-32
• 结论和展望32-33
• 参考文献33-37
• 文献综述37-45
• 参考文献42-45
• 致谢45-46
• 作者简介46-47
• 导师评阅表47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 陈秀;陈莉芬;吴万福;胡长林;;缺氧对离体培养的海马神经元兴奋性的影响[J];重庆医学;2011年13期

2 王鸿南,王希军,宋江顺;急性缺氧对豚鼠听性脑干反应的影响[J];第一军医大学学报;2000年03期

3 王丽萍;王苹;杜波;杜宝东;;缺氧对体外培养耳蜗螺旋神经节细胞及神经纤维的影响[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2008年22期

4 李新芝;司军强;张忠双;赵磊;李丽;马克涛;;急性缺氧增强豚鼠小脑前下动脉平滑肌细胞外向电流并抑制缝隙连接[J];生理学报;2011年06期

5 陆彤;王如兴;蒋彬;;电压门控型钾离子通道家族[J];中国心脏起搏与心电生理杂志;2010年03期

6 杨凤琼;邓骥;聂杨;;179例窒息新生儿听力筛查临床分析[J];中国妇幼保健;2012年29期

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本文编号：326055