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EB病毒BARF1及其变异型基因改变鼻咽癌细胞生物学行为机制的初步研究

发布时间:2017-04-26 03:15

  本文关键词:EB病毒BARF1及其变异型基因改变鼻咽癌细胞生物学行为机制的初步研究,由笔耕文化传播整理发布。


【摘要】:背景和目的:EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码早期基因BARF1具有转化作用,在多数鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中表达,可能在NPC发生中发挥重要作用。我们前期研究发现BARF1及其变异型基因过表达均提高了EBV阴性细胞系CNE的增殖和抗凋亡能力。本研究旨在进一步探讨BARF1基因及其变异型对NPC细胞系HONE1生物学行为的影响及机制,为最终阐明BARF1参与NPC的致癌机制提供依据。方法:以B95-8型和V29A变异型BARF1基因稳定转染HONE1细胞及对照细胞为研究对象,进行MTT实验、平板克隆形成实验、凋亡诱导实验、细胞迁移侵袭实验和裸鼠致瘤实验,检测BARF1原型和变异型基因对HONE1细胞生物学行为的影响;并采用表达谱芯片检测和筛选BARF1基因转染前后差异表达基因,对差异表达基因进行功能注释和生物反应通路分析,绘制差异基因相互作用蛋白网络图,找出差异倍数大的关键节点基因,选择与细胞增殖、凋亡和迁移相关通路,在BARF1转染细胞及裸鼠瘤组织中用real-time PCR进行表达验证。结果:(1)细胞生物学实验:与对照细胞比较,BARF1原型和变异型基因转染细胞MTT吸光度值和平板克隆形成率增高(P均小于0.05);顺铂诱导凋亡后细胞存活率提高,而细胞凋亡率降低(P均小于0.05);细胞迁移和侵袭能力提高(P均小于0.05)。BARF1原型和变异型基因转染细胞之间细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭均无显著性差异。(2)裸鼠致瘤实验:与对照细胞比较,BARF1变异型基因转染细胞裸鼠致瘤能力无明显提高。(3)基因芯片分析:聚类分析显示B95-8型和V29A变异型细胞聚类在同一簇中,与对照细胞比较,共同差异基因317条,其中上调94条,下调223条。功能注释和KEGG分析发现多条差异基因与细胞粘附、细胞增殖、细胞凋亡和细胞迁移侵袭等生物学过程有关,参与细胞因子受体相互作用通路、细胞粘附分子通路、Erb B信号传导途径通路和癌症通路等。(4)通路挑选及验证:Real-time PCR显示,与对照细胞比较,BARF1基因转染细胞中CDH1、TP63、MIR205HG、GJA1和S100A2表达下调,ZEB2表达上调,与芯片结果一致;BARF1基因转染细胞形成裸鼠瘤组织中上述基因检测结果与转染细胞中一致。结论:(1)BARF1原型和V29A变异型基因均可促进NPC细胞系HONE1增殖、提高其抗凋亡能力和迁移侵袭能力,从而增强HONE1细胞肿瘤原性,V29A变异不影响其致癌潜能。(2)BARF1基因过表达可调控多种与细胞增生、凋亡、迁移和侵袭等肿瘤相关基因的表达。(3)BARF1基因可能通过下调CDH1、GJA1和S100A2基因,促进细胞增殖和迁移,通过下调TP63、MIR205HG并上调ZEB2而抑制细胞凋亡,促进细胞迁移和侵袭。
【关键词】:EB病毒 BARF1 鼻咽癌 生物学行为 致癌机制
【学位授予单位】:青岛大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R739.63
【目录】:
  • 摘要2-3
  • abstract3-6
  • 引言6-8
  • 第一章 材料与方法8-21
  • 1.1 仪器、试剂和耗材8-9
  • 1.2 慢病毒转染目的细胞及稳定转染细胞筛选9
  • 1.3 稳定转染细胞中BARF1基因表达检测9-12
  • 1.4 细胞生物学实验12-14
  • 1.5 裸鼠成瘤实验14-15
  • 1.6 基因芯片实验15-19
  • 1.7 通路挑选及验证19-20
  • 1.8 统计学分析20-21
  • 第二章 结果21-39
  • 2.1 稳定转染细胞BARF1基因表达21-22
  • 2.2 BARF1原型和变异型基因对细胞增殖的影响22-23
  • 2.3 BARF1原型和变异型基因对细胞凋亡的影响23-24
  • 2.4 BARF1原型和变异型基因对细胞迁移和侵袭的影响24-25
  • 2.5 裸鼠成瘤实验结果25-26
  • 2.6 基因芯片结果26-37
  • 2.7 通路挑选及验证37-39
  • 第三章 讨论39-43
  • 研究结论43-44
  • 参考文献44-48
  • 综述48-63
  • 参考文献56-63
  • 攻读学位期间的研究成果63-64
  • 致谢64-65

【参考文献】

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 司英健;Cx43基因修饰的白血病骨髓基质细胞对Jurkat细胞体外调节作用的研究[D];第三军医大学;2007年


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本文编号:327640

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