钙结合蛋白S100A8和S100A9对鼻咽癌侵袭和迁移的影响

发布时间：2017-04-26 18:13

  本文关键词：钙结合蛋白S100A8和S100A9对鼻咽癌侵袭和迁移的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本文包括两个部分：(一)外源性S100A8和S100A9蛋白质对鼻咽癌细胞侵袭和迁移的影响； (二)S100A8和S100A9真核双表达质粒的构建和表达。第一部分外源性S100A8和S100A9蛋白质对鼻咽癌细胞侵袭和迁移的影响目的：探讨外源性S100A8和S100A9蛋白对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响以及在此过程中MMPs基因的表达变化,为S100A8、S 100A9蛋白在鼻咽癌细胞侵袭转移相关机制研究提供理论基础。方法：①CCK8法检测不同浓度的S100A8、S100A9蛋白对CNE1、CNE2细胞增殖能力的影响；②以含1μg/ml的S100A8、S100A9蛋白复合物的培养基为实验组,不加S100A8、S100A9蛋白复合物的培养基为对照组,分别进行Transwell小室迁移和侵袭实验检测鼻咽癌细胞的侵袭迁移情况；③在培养基中添加1μg/ml的S100A8、S100A9蛋白复合物的培养细胞为实验组,不加S100A8、S100A9蛋白复合物的培养细胞为对照组进行细胞培养,real time-PCR检测侵袭迁移标志物基质金属蛋白酶MMPs基因的表达。结果：①CCK8实验结果显示,0-10ng/ml的S100A8/A9蛋白能够促进CNE1、CNE2细胞增殖,当浓度大于30μg/ml时,则表现出抑制作用；②Transwell细胞迁移实验结果显示,实验组与对照组比较,穿越聚碳酸酯膜的细胞数量多,迁移能力强,差异具有统计学意义(P0.05)；③Transwell细胞侵袭实验结果显示,实验组与对照组比较,穿越聚碳酸酯膜的细胞数量多,侵袭能力强,差异具有统计学意义(P0.05)；④real time-PCR检测基质金属蛋白酶MMPs基因结果显示,实验组与对照组相比,CNE1细胞有MMP2、MMP7基因表达上调,差异具有统计学意义(P0.05),MNP9、MMP12基因表达下调,差异具有统计学意义(P0.05)；CNE2细胞有MMP1、MMP8、MMP9、MMP12基因表达下调,差异具有统计学意义(P0.05)。结论：低浓度(10ng/ml、S100A8/A9蛋白能够促进CNE1、CNE2细胞增殖,超过30gg/ml则呈现抑制细胞生长。1μg/ml的S100A8/A9蛋白浓度能够促进CNE1、CNE2细胞侵袭和迁移。测基质金属蛋白酶MMPs基因结果显示,实验组与对照组相比,CNE1细胞有MMP2、MMP7基因表达上调,差异具有统计学意义(P0.05),MNP9、MMP12基因表达下调,差异具有统计学意义(P0.05)；CNE2细胞有MMP1、MMP8、MMP9、MMP12基因表达下调,差异具有统计学意义(P0.05)。结论：低浓度(10ng/ml、S100A8/A9蛋白能够促进CNE1、CNE2细胞增殖,超过30gg/ml则呈现抑制细胞生长。1μg/ml的S100A8/A9蛋白浓度能够促进CNE1、CNE2细胞侵袭和迁移。第二部分S100A8和S100A9真核双表达质粒的构建和表达目的：在鼻咽癌细胞中克隆S100A8和S100A9基因并构建表达质粒和在鼻咽癌细胞中表达,为内源性S100A8和S100A9蛋白质与鼻咽癌发生发展的关系研究奠定基础。方法：PCR扩增目的基因S100A8和S100A9片段,将其插入载体pBudCE4.1构建S100A8-S100A9-pBudCE4.1表达质粒,经双酶切、PCR及测序鉴定后转染至人鼻咽癌细胞系(CNE1)进行表达并用real time-PCR 及 Western Blot进行检测。结果：PCR、双酶切和测序结果显示,S100A8和S100A9氨基酸序列无变异(S100A8有1个碱基突变),表达质粒S100A8-S100A9-pBudCE4.1构建正确。Real time-PCR和Western Blot结果显示,S 100A8和S100A9基因在CNE1中正确转录与表达。结论：成功克隆S100A8和S100A9基因并构建S100A8-S100A9-pBudCE4.1表达质粒且可在鼻咽癌细胞中稳定表达。
【关键词】：鼻咽癌细胞系 S100A8/A9 细胞迁移 细胞侵袭 MMPs 鼻咽癌 质粒pBudCE4.1 鼻咽癌细胞系 S100A8 S100A9
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 个人简历3-6
• 英汉缩略对照表6-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 第一部分 外源性S100A8和S100A9蛋白质对鼻咽癌细胞侵袭和迁移的影响16-38
• 1 材料16-18
• 2 方法18-25
• 3 结果25-32
• 4 讨论32-37
• 5 小结37-38
• 第二部分 S100A8和S100A9真核双表达质粒的构建和表达38-68
• 1 材料38-41
• 2 方法41-55
• 3 结果55-65
• 4 讨论65-67
• 5 小结67-68
• 参考文献68-73
• 综述73-86
• 参考文献81-86
• 致谢86-87
• 攻读硕士期间发表的学术论文87

【参考文献】

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本文编号：328983