高糖诱导中性粒细胞胞外陷阱在糖尿病性视网膜病变中的作用机制研究
发布时间：2021-07-22 17:40
中性粒细胞在发生网捕死亡后,可释放出一种中性粒细胞特有的网状结构——中性粒细胞胞外陷阱（NETs）,在免疫反应中发挥作用,捕获多种病原体及无菌性晶体。研究表明,NETs可参与多种疾病的发生,其中包括糖尿病（Diabetes Mellites,DM）及其眼部并发症糖尿病性视网膜病变（Diabetic Retinopathy,DR）,然而,NETs与DR之间的具体关系尚不清楚。我们的研究发现,NETs在糖尿病患者的血清中显著升高,尤其在增殖期糖尿病性视网膜病变患者（Proliferation Diabetic Retinopathy,PDR）中升高最为显著。体外细胞实验表明,随着时间的延长,高糖刺激下NETs的产生逐渐增多,并主要通过NADPH氧化酶依赖的途径产生。我们进一步在高糖高脂饲料联合低剂量链脲佐菌素（Streptozocin,STZ）诱导的2型糖尿病大鼠模型中证实了中性粒细胞在眼部的存在,并发现当DR发生时,血-视网膜屏障破坏,中性粒细胞从外周血中越过血视网膜屏障,与视网膜血管内皮细胞相粘附,进一步加剧了DR的炎症反应,加速疾病的进展。此外,在糖尿病个体的玻璃体腔及视网膜中也发现...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
高糖高脂饮食联合小剂量STZ诱导2型糖尿病大鼠造模成功Figure1.Highfatdietandlowdosestreptozotocin(STZ)-induceddiabeticrats
重庆医科大学硕士研究生学位论文对照以排除年龄性别的干扰。由于 NETs是由 DNA 骨架和附着在其上的多种蛋白共同组成，因此，我们选择胞外游离 DNA/NETs 及其中一种酶 NE 作为代表，抽取并分离受试者血清后检测以上两种成分。我们利用 pico-green 检测胞外游离 DNA，结果发现，游离 DNA/NETs 的水平在所有 2 型糖尿病患者的血清中均较正常对照有所升高（图 2A）。由于长期高血糖状态会导致糖尿病微血管并发症，为了探讨长期高血糖下是否会有更多 NETs形成，我们对所有 2型糖尿病患者进行细分，进一步探讨了其在 DWR、NPDR 及PDR 三种亚型中的 NETs 水平。结果发现，与正常对照相比，胞外 DNA/NETs 的含量在 DWR、NPDR 及 PDR 患者血清中均有所升高，NPDR、PDR 患者外周血血清中游离 DNA/NETs较 DWR患者无统计学差异（图 2B）。
图 3. 受试者血清中 NE 的表达水平Figure 3. NE expression in the serum of all human subjectsA. NE 在 HC 和 T2DM 患者血清中的表达水平（nHC=27；nT2DM=90。****P < 0.0001）；B.NE 在 HC、DWR、NPDR、PDR 患者血清中的表达水平（采用非配对 t 检验分析各组于健康对照之间的差异；nHC = 27; nDWR = 30; nNPDR = 29; nPDR =31。****P < 0.0001）。如图 4 所示，pico-green 实验结果表示 2 型糖尿病大鼠血清中游离 DNA/NETs水平较正常对照鼠显著增多。动物模型研究结果与人血清结果相一致，充分说明了 NETs 相关标志物在糖尿病及糖尿病视网膜病变个体的外周血中显著增加，为下一步体外实验研究高糖是否能诱导中性粒细胞产生 NETs提供一定的理论基础。
本文编号：3297597
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
高糖高脂饮食联合小剂量STZ诱导2型糖尿病大鼠造模成功Figure1.Highfatdietandlowdosestreptozotocin(STZ)-induceddiabeticrats
重庆医科大学硕士研究生学位论文对照以排除年龄性别的干扰。由于 NETs是由 DNA 骨架和附着在其上的多种蛋白共同组成，因此，我们选择胞外游离 DNA/NETs 及其中一种酶 NE 作为代表，抽取并分离受试者血清后检测以上两种成分。我们利用 pico-green 检测胞外游离 DNA，结果发现，游离 DNA/NETs 的水平在所有 2 型糖尿病患者的血清中均较正常对照有所升高（图 2A）。由于长期高血糖状态会导致糖尿病微血管并发症，为了探讨长期高血糖下是否会有更多 NETs形成，我们对所有 2型糖尿病患者进行细分，进一步探讨了其在 DWR、NPDR 及PDR 三种亚型中的 NETs 水平。结果发现，与正常对照相比，胞外 DNA/NETs 的含量在 DWR、NPDR 及 PDR 患者血清中均有所升高，NPDR、PDR 患者外周血血清中游离 DNA/NETs较 DWR患者无统计学差异（图 2B）。
图 3. 受试者血清中 NE 的表达水平Figure 3. NE expression in the serum of all human subjectsA. NE 在 HC 和 T2DM 患者血清中的表达水平（nHC=27；nT2DM=90。****P < 0.0001）；B.NE 在 HC、DWR、NPDR、PDR 患者血清中的表达水平（采用非配对 t 检验分析各组于健康对照之间的差异；nHC = 27; nDWR = 30; nNPDR = 29; nPDR =31。****P < 0.0001）。如图 4 所示，pico-green 实验结果表示 2 型糖尿病大鼠血清中游离 DNA/NETs水平较正常对照鼠显著增多。动物模型研究结果与人血清结果相一致，充分说明了 NETs 相关标志物在糖尿病及糖尿病视网膜病变个体的外周血中显著增加，为下一步体外实验研究高糖是否能诱导中性粒细胞产生 NETs提供一定的理论基础。
本文编号：3297597
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