人鼻咽癌多药耐药细胞株CNE2/ADM的建立及生物学特性研究
发布时间：2021-08-03 19:30
目的建立人鼻咽癌多药耐药细胞株CNE2/ADM,并研究其生物学特性。方法以人鼻咽癌细胞株CNE2为亲本细胞,采用阿霉素（ADM）浓度梯度递增法诱导建立多药耐药细胞株CNE2/ADM。通过观察细胞形态学变化,药物敏感性试验,测定生长曲线、群体倍增时间、细胞周期及P-糖蛋白（P-gp）功能和表达情况,评价CNE2/ADM的生物学特性。结果与CNE2细胞相比,CNE2/ADM耐药细胞异形明显,并对ADM在内的4种化疗药物产生了耐药性,增殖速度减慢,群体倍增时间延长（P<0.05）,G0/G1期细胞增多,S期、G2/M期细胞减少（P<0.05）,P-gp的药物泵出功能增强、表达水平升高。结论成功建立了人鼻咽癌多药耐药细胞株CNE2/ADM,其具有典型的多药耐药表型,可作为进一步研究鼻咽癌多药耐药机制及筛选逆转剂较为理想的细胞模型。
【文章来源】：成都医学院学报. 2016,11(02)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
图１ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ在光镜下的细胞形态（×２００）注：Ａ：ＣＮＥ２；Ｂ：ＣＮＥ２／ＡＤＭ
２１１３５．６３±６．４２ａ１２．９８顺铂９．４７±０．３３４５．８２±３．５７ｂ４．８４长春新碱１７４．５９±６．２５９６６．７６±１０．４２ｃ５．５４５－氟尿嘧啶１９０．１４±６．２８３８５．６０±１２．６５ｄ２．０３注：与ＣＮＥ２相比，ａＰ＝０．００２，ｂＰ＝０．００５，ｃＰ＝０．００３，ｄＰ＝０．００６图１ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ在光镜下的细胞形态（×２００）注：Ａ：ＣＮＥ２；Ｂ：ＣＮＥ２／ＡＤＭ图２ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ的生长曲线２．３细胞周期分析细胞周期分析结果显示，耐药细胞较亲代细胞的细胞周期发生改变，表现为ＣＮＥ２／ＡＤＭ细胞的Ｇ０／Ｇ１期分布增多，Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期分布减少，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）（图３、表２）。表２ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ的细胞周期分布（ｎ＝３，珔ｘ±ｓ，％）分类Ｇ０／Ｇ１ＳＧ２／ＭＣＮＥ２５４．７３±１．５０２１．２３±０．８５２２．２７±０．８５ＣＮＥ２／ＡＤＭ６９．６０±０．８９ａ１６．７３±０．７２ｂ１２．５７±１．９８ｃ注：与ＣＮＥ２相比，ａＰ＝０．００１，ｂＰ＝０．００７，ｃＰ＝０．００４２．４Ｐ－ｇｐ转运功能检测结果Ｒｈｏ１２３外排实验结果显示，ＣＮＥ２／ＡＤＭ和ＣＮＥ２细胞内Ｒｈｏ１２３荧光强度分别为（１０．６８±２．４２）×１０５和（５２．３４±２．６９）×１０５，ＣＮＥ２／ＡＤＭ细胞外排Ｒｈｏ１２３增多，差异有统计
图３ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ的细胞周期分布注：Ａ：ＣＮＥ２；Ｂ：ＣＮＥ２／ＡＤＭ图４ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ中Ｐ－ｇｐ表达情况３讨论ＭＤＲ是指肿瘤细胞一旦对一种化疗药物产生耐药性，对其他多种结构和作用机制不同的化疗药物也产生交叉耐药，致使药物疗效逐渐下降的现象［７］，其本质上是肿瘤细胞在生存压力下逐步建立起的一种适应过程［８－９］。体外建立稳定的多药耐药细胞株是研究ＭＤＲ产生和逆转的基础和前提。药物浓度梯度递增法是目前构建肿瘤多药耐药细胞株较为常用的的方法，虽然其操作费时、繁琐，但容易把握、成功率较高，且所构建的细胞模型耐药性稳定，在撤药后仍能保持较高的耐药性［１０］。多药耐药细胞模型构建后的评价方法一般包括：耐药指数的检测、细胞生物指标的检测及耐药标志物的检测［１１］。因此，本研究采用阿霉素浓度梯度递增法诱导建立人鼻咽癌多药耐药细胞株ＣＮＥ２／ＡＤＭ，并从上述３个方面对其生物学特性进行评价。药物敏感性检测结果显示，ＣＮＥ２／ＡＤＭ不仅对阿霉素产生了耐药，而且对顺铂，长春新碱和５－氟尿嘧啶这３种结构和作用机制不同的鼻咽癌化疗药物也产生了不同程度的交叉耐药性，耐药指数分别为１２．９８、４．８４、５．５４和２．０３。Ｓｎｏｗ等［１２］的分度标准认为，耐药指数＜５属低度耐药，５～１５之间属中度耐药，＞１５属高度耐药。依此标准划分，ＣＮＥ２／ＡＤＭ细胞对阿霉素和长春新碱均为中度耐药，而对顺铂和５－氟尿嘧啶则均为低度耐药。ＣＮＥ２／ＡＤＭ在不含阿霉素的培养基中反复传代２
【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤多药耐药性体外模型的方法与评价[J]. 乔婷婷,彭芳. 医学综述. 2015(22)
[2]肿瘤多药耐药模型的建立与评价方法[J]. 张峰,岑娟. 药物评价研究. 2013(05)
[3]肿瘤多药耐药机制及其相关信号通路的研究进展[J]. 邢风娟,王岩,孟令杰. 中国实验诊断学. 2013(02)
[4]鼻咽癌化疗现状及进展[J]. 冼献清,谢民强,江刚. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2013(03)
[5]鼻咽癌放化综合治疗进展[J]. 高健全. 海南医学. 2012(11)
[6]Establishment of a human hepatoma multidrug resistant cell line in vitro[J]. Yuan Zhou,Xian-Long Ling,Shi-Wei Li,Xin-Qiang Li,Bin Yan,Department of Gastroenterology,Xinqiao Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400037,China. World Journal of Gastroenterology. 2010(18)
[7]胰腺癌阿霉素耐药细胞株SW1990/ADM的建立及其耐药机理研究[J]. 张立阳,赵玉沛,吴元德,廖泉,郭俊超,刘子文,张太平. 中国普外基础与临床杂志. 2005(01)
硕士论文
[1]人乳腺癌耐药细胞株的建立及其耐药机制研究[D]. 李文静.南京医科大学 2012
本文编号：3320200
【文章来源】：成都医学院学报. 2016,11(02)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
图１ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ在光镜下的细胞形态（×２００）注：Ａ：ＣＮＥ２；Ｂ：ＣＮＥ２／ＡＤＭ
２１１３５．６３±６．４２ａ１２．９８顺铂９．４７±０．３３４５．８２±３．５７ｂ４．８４长春新碱１７４．５９±６．２５９６６．７６±１０．４２ｃ５．５４５－氟尿嘧啶１９０．１４±６．２８３８５．６０±１２．６５ｄ２．０３注：与ＣＮＥ２相比，ａＰ＝０．００２，ｂＰ＝０．００５，ｃＰ＝０．００３，ｄＰ＝０．００６图１ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ在光镜下的细胞形态（×２００）注：Ａ：ＣＮＥ２；Ｂ：ＣＮＥ２／ＡＤＭ图２ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ的生长曲线２．３细胞周期分析细胞周期分析结果显示，耐药细胞较亲代细胞的细胞周期发生改变，表现为ＣＮＥ２／ＡＤＭ细胞的Ｇ０／Ｇ１期分布增多，Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期分布减少，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）（图３、表２）。表２ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ的细胞周期分布（ｎ＝３，珔ｘ±ｓ，％）分类Ｇ０／Ｇ１ＳＧ２／ＭＣＮＥ２５４．７３±１．５０２１．２３±０．８５２２．２７±０．８５ＣＮＥ２／ＡＤＭ６９．６０±０．８９ａ１６．７３±０．７２ｂ１２．５７±１．９８ｃ注：与ＣＮＥ２相比，ａＰ＝０．００１，ｂＰ＝０．００７，ｃＰ＝０．００４２．４Ｐ－ｇｐ转运功能检测结果Ｒｈｏ１２３外排实验结果显示，ＣＮＥ２／ＡＤＭ和ＣＮＥ２细胞内Ｒｈｏ１２３荧光强度分别为（１０．６８±２．４２）×１０５和（５２．３４±２．６９）×１０５，ＣＮＥ２／ＡＤＭ细胞外排Ｒｈｏ１２３增多，差异有统计
图３ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ的细胞周期分布注：Ａ：ＣＮＥ２；Ｂ：ＣＮＥ２／ＡＤＭ图４ＣＮＥ２和ＣＮＥ２／ＡＤＭ中Ｐ－ｇｐ表达情况３讨论ＭＤＲ是指肿瘤细胞一旦对一种化疗药物产生耐药性，对其他多种结构和作用机制不同的化疗药物也产生交叉耐药，致使药物疗效逐渐下降的现象［７］，其本质上是肿瘤细胞在生存压力下逐步建立起的一种适应过程［８－９］。体外建立稳定的多药耐药细胞株是研究ＭＤＲ产生和逆转的基础和前提。药物浓度梯度递增法是目前构建肿瘤多药耐药细胞株较为常用的的方法，虽然其操作费时、繁琐，但容易把握、成功率较高，且所构建的细胞模型耐药性稳定，在撤药后仍能保持较高的耐药性［１０］。多药耐药细胞模型构建后的评价方法一般包括：耐药指数的检测、细胞生物指标的检测及耐药标志物的检测［１１］。因此，本研究采用阿霉素浓度梯度递增法诱导建立人鼻咽癌多药耐药细胞株ＣＮＥ２／ＡＤＭ，并从上述３个方面对其生物学特性进行评价。药物敏感性检测结果显示，ＣＮＥ２／ＡＤＭ不仅对阿霉素产生了耐药，而且对顺铂，长春新碱和５－氟尿嘧啶这３种结构和作用机制不同的鼻咽癌化疗药物也产生了不同程度的交叉耐药性，耐药指数分别为１２．９８、４．８４、５．５４和２．０３。Ｓｎｏｗ等［１２］的分度标准认为，耐药指数＜５属低度耐药，５～１５之间属中度耐药，＞１５属高度耐药。依此标准划分，ＣＮＥ２／ＡＤＭ细胞对阿霉素和长春新碱均为中度耐药，而对顺铂和５－氟尿嘧啶则均为低度耐药。ＣＮＥ２／ＡＤＭ在不含阿霉素的培养基中反复传代２
【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤多药耐药性体外模型的方法与评价[J]. 乔婷婷,彭芳. 医学综述. 2015(22)
[2]肿瘤多药耐药模型的建立与评价方法[J]. 张峰,岑娟. 药物评价研究. 2013(05)
[3]肿瘤多药耐药机制及其相关信号通路的研究进展[J]. 邢风娟,王岩,孟令杰. 中国实验诊断学. 2013(02)
[4]鼻咽癌化疗现状及进展[J]. 冼献清,谢民强,江刚. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2013(03)
[5]鼻咽癌放化综合治疗进展[J]. 高健全. 海南医学. 2012(11)
[6]Establishment of a human hepatoma multidrug resistant cell line in vitro[J]. Yuan Zhou,Xian-Long Ling,Shi-Wei Li,Xin-Qiang Li,Bin Yan,Department of Gastroenterology,Xinqiao Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400037,China. World Journal of Gastroenterology. 2010(18)
[7]胰腺癌阿霉素耐药细胞株SW1990/ADM的建立及其耐药机理研究[J]. 张立阳,赵玉沛,吴元德,廖泉,郭俊超,刘子文,张太平. 中国普外基础与临床杂志. 2005(01)
硕士论文
[1]人乳腺癌耐药细胞株的建立及其耐药机制研究[D]. 李文静.南京医科大学 2012
本文编号：3320200
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