miR-34c对慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉上皮纤毛细胞分化的影响
发布时间：2021-08-08 07:54
目的探讨miR-34c对慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）鼻上皮纤毛细胞分化的影响及其调控机制。方法获取正常对照及CRSwNP患者的鼻上皮细胞,real-time PCR检测miR-34c的表达,免疫细胞化学检测纤毛细胞数量。建立鼻上皮细胞气液界面培养体系,敲低表达miR-34c后免疫荧光检测纤毛标记物β-tubulin Ⅳ的表达。采用IL-13刺激鼻上皮细胞,real-time PCR检测miR-34c和纤毛发生转录因子FOXJ1的表达。结果与正常对照鼻上皮细胞相比,CRSwNP鼻上皮中miR-34c表达量降低（正常对照13.43±10.31 vs CRSwNP 5.53±2.56,P<0.05）,纤毛细胞百分比也有明显下调（正常对照18.20%±2.52% vs CRSwNP 12.58%±2.06%,P<0.05）。在鼻上皮细胞中敲低表达miR-34c后,纤毛细胞数量明显降低。IL-13刺激可以明显降低miR-34c（刺激前5.85±4.54 vs 刺激后0.43±0.40,P<...
【文章来源】：中国耳鼻咽喉头颈外科. 2020,27(01)CSCD
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
敲低表达miR-34c对鼻上皮细胞纤毛细胞数量的影响。免疫荧光染色显示纤毛细胞标记物β-tubulin Ⅳ和上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的表达。A 阴性对照空载体组,B miR-34c抑制物转染组。红色、绿色、蓝色荧光分别表示ZO-1、β-tubulin Ⅳ和细胞核。n=3,Bar=20 μm
2.1 正常对照和鼻息肉上皮细胞中miR-34c表达及纤毛细胞数量比较。real-time PCR技术检测miR-34c在正常对照和鼻息肉上皮细胞中的表达,结果显示,与正常对照鼻上皮细胞相比,鼻息肉来源的上皮细胞中miR-34c的相对表达量明显降低(正常对照13.43±10.31 vs CRSwNP 5.53±2.56),差异具有统计学意义(图1A)。同时采用细胞涂片结合免疫细胞化学技术检测鼻上皮细胞中纤毛细胞数量,发现正常对照鼻上皮细胞中纤毛细胞比例为(18.20±2.52)%,而鼻息肉上皮中纤毛细胞比例为(12.58±2.06)%,较正常对照组明显降低(图1B)。2.2 敲低表达miR-34c对鼻上皮细胞纤毛细胞数量的影响。为探讨miR-34c对鼻上皮纤毛细胞分化的直接影响,我们利用化学合成的miR-34c抑制剂转染细胞,敲低miR-34c表达,然后采用气液界面培养体系继续培养至上皮细胞分化完全后检测纤毛细胞比例。其中绿色荧光代表纤毛标记物β-tubulin Ⅳ着色,与阴性对照空载体组相比(图2A),miR-34c抑制物转染组,上皮细胞中纤毛细胞比例有明显下调(图2B)。红色荧光代表经ZO-1抗体染色后相邻上皮细胞间的紧密连接,其勾勒出细胞边界,显示两组细胞融合良好。
2.3 IL-13对miR-34c和FOXJ1表达的调控。为进一步探讨miR-34c表达的上游调控机制,我们应用Th2细胞因子IL-13刺激气液界面培养的鼻上皮细胞,检测其对miR-34c以及纤毛发生关键转录因子FOXJ1表达的影响。结果显示,IL-13 10 ng/ml刺激上皮细胞21天后,miR-34c(刺激前5.85±4.54 vs 刺激后0.43±0.40)及FOXJ1(刺激前1.41±1.09 vs 刺激后0.15±0.19)的表达均较刺激前有明显下调,差异有统计学意义(图3)。呼吸道上皮黏液纤毛清除系统功能障碍与多种呼吸道炎性疾病发生相关,包括哮喘、慢性阻塞性肺病、囊性纤维化等[2]。我们前期的研究发现,与正常对照鼻上皮相比,CRSwNP患者鼻上皮中纤毛细胞数量明显减少,纤毛运动功能减弱,同时伴有杯状细胞数量增加及黏液过度分泌[5],证实黏液纤毛功能障碍与CRSwNP发病密切相关。然而,关于CRSwNP患者鼻腔黏液纤毛清除系统功能障碍的发生机制目前尚不是很清楚。在本研究中,我们发现CRSwNP患者鼻上皮中miR-34c表达较健康对照鼻上皮明显降低,并且在体外培养的鼻上皮细胞中敲低表达miR-34c后,纤毛细胞数量有明显减少,提示miR-34c参与调控鼻息肉发病过程中的纤毛功能障碍。并且,我们进一步探索了miR-34c的上游调控机制,发现炎性因子IL-13刺激可以下调miR-34c和纤毛发生关键转录因子FOXJ1的表达,提示IL-13可以通过下调miR-34c表达进而抑制纤毛发生,参与调控CRSwNP黏液纤毛功能障碍。
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠脑皮质神经干细胞体外培养及miRNAs影响其分化能力[J]. 赵祥宇,舒鹏程,张靖,阴彬,彭小忠. 基础医学与临床. 2011(06)
本文编号：3329551
【文章来源】：中国耳鼻咽喉头颈外科. 2020,27(01)CSCD
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
敲低表达miR-34c对鼻上皮细胞纤毛细胞数量的影响。免疫荧光染色显示纤毛细胞标记物β-tubulin Ⅳ和上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的表达。A 阴性对照空载体组,B miR-34c抑制物转染组。红色、绿色、蓝色荧光分别表示ZO-1、β-tubulin Ⅳ和细胞核。n=3,Bar=20 μm
2.1 正常对照和鼻息肉上皮细胞中miR-34c表达及纤毛细胞数量比较。real-time PCR技术检测miR-34c在正常对照和鼻息肉上皮细胞中的表达,结果显示,与正常对照鼻上皮细胞相比,鼻息肉来源的上皮细胞中miR-34c的相对表达量明显降低(正常对照13.43±10.31 vs CRSwNP 5.53±2.56),差异具有统计学意义(图1A)。同时采用细胞涂片结合免疫细胞化学技术检测鼻上皮细胞中纤毛细胞数量,发现正常对照鼻上皮细胞中纤毛细胞比例为(18.20±2.52)%,而鼻息肉上皮中纤毛细胞比例为(12.58±2.06)%,较正常对照组明显降低(图1B)。2.2 敲低表达miR-34c对鼻上皮细胞纤毛细胞数量的影响。为探讨miR-34c对鼻上皮纤毛细胞分化的直接影响,我们利用化学合成的miR-34c抑制剂转染细胞,敲低miR-34c表达,然后采用气液界面培养体系继续培养至上皮细胞分化完全后检测纤毛细胞比例。其中绿色荧光代表纤毛标记物β-tubulin Ⅳ着色,与阴性对照空载体组相比(图2A),miR-34c抑制物转染组,上皮细胞中纤毛细胞比例有明显下调(图2B)。红色荧光代表经ZO-1抗体染色后相邻上皮细胞间的紧密连接,其勾勒出细胞边界,显示两组细胞融合良好。
2.3 IL-13对miR-34c和FOXJ1表达的调控。为进一步探讨miR-34c表达的上游调控机制,我们应用Th2细胞因子IL-13刺激气液界面培养的鼻上皮细胞,检测其对miR-34c以及纤毛发生关键转录因子FOXJ1表达的影响。结果显示,IL-13 10 ng/ml刺激上皮细胞21天后,miR-34c(刺激前5.85±4.54 vs 刺激后0.43±0.40)及FOXJ1(刺激前1.41±1.09 vs 刺激后0.15±0.19)的表达均较刺激前有明显下调,差异有统计学意义(图3)。呼吸道上皮黏液纤毛清除系统功能障碍与多种呼吸道炎性疾病发生相关,包括哮喘、慢性阻塞性肺病、囊性纤维化等[2]。我们前期的研究发现,与正常对照鼻上皮相比,CRSwNP患者鼻上皮中纤毛细胞数量明显减少,纤毛运动功能减弱,同时伴有杯状细胞数量增加及黏液过度分泌[5],证实黏液纤毛功能障碍与CRSwNP发病密切相关。然而,关于CRSwNP患者鼻腔黏液纤毛清除系统功能障碍的发生机制目前尚不是很清楚。在本研究中,我们发现CRSwNP患者鼻上皮中miR-34c表达较健康对照鼻上皮明显降低,并且在体外培养的鼻上皮细胞中敲低表达miR-34c后,纤毛细胞数量有明显减少,提示miR-34c参与调控鼻息肉发病过程中的纤毛功能障碍。并且,我们进一步探索了miR-34c的上游调控机制,发现炎性因子IL-13刺激可以下调miR-34c和纤毛发生关键转录因子FOXJ1的表达,提示IL-13可以通过下调miR-34c表达进而抑制纤毛发生,参与调控CRSwNP黏液纤毛功能障碍。
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠脑皮质神经干细胞体外培养及miRNAs影响其分化能力[J]. 赵祥宇,舒鹏程,张靖,阴彬,彭小忠. 基础医学与临床. 2011(06)
本文编号：3329551
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