Mecom对耳蜗支持细胞增殖及转分化的影响

发布时间：2021-08-21 20:59

　　目的:观察Mecom基因在小鼠内耳发育过程中不同阶段的动态表达特征及规律,并进一步研究Mecom基因对小鼠耳蜗支持细胞增殖及分化的影响。方法:1.内耳发育过程中Mecom蛋白的表达特征:选用胚胎第9.5天（E9.5）到胚胎期18.5天（E18.5）的C57BL/6胎鼠,利用冰冻切片及免疫荧光组织化学染色技术观察在内耳发育阶段Mecom的表达特征规律;2、腺病毒转染基底膜过表达Mecom蛋白:利用腺病毒转染技术转染基底膜,通过免疫荧光染色观察腺病毒转染率,同时利用蛋白免疫印迹实验及实时荧光定量PCR实验进一步检测Mecom在基因及蛋白水平的表达变化;3、过表达Mecom基因对耳蜗支持细胞的增殖及转分化的影响:利用新生鼠耳蜗毛细胞损伤模型,过表达Mecom基因后,利用免疫荧光染色及qPCR实验观察上调Mecom基因对内耳支持细胞的影响。结果:1.内耳发育过程中Mecom蛋白的表达特征:在E9.5天时,未在听泡及其周围组织观察到Mecom蛋白的明显表达,当胚胎发育到E10.5天时,Mecom蛋白开始在感觉上皮周围弱表达,其局限表达于听泡周围的间充质;E11.5时期Mecom的表达增强但也局限... 

【文章来源】：皖南医学院安徽省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

内耳发育各阶段中Mecom蛋白的表达A1：沿横线所示进行连续冰冻切片；A2:红色标记Sox2的表达；A3：E11时期，以PBS代替Evi-1抗小鼠单克隆抗体作为阴性对照，免疫组化无阳性显色

15.5及E18.5时期，Evi-1及Sox2的表达

图 3 腺病毒载体的构建（A）：pHBAD-EF1-MCS-3flag-CMV-GFP 载体图谱； （B）：合成酶切验证结果；Lane 1：Plasmid ；Lane 2: Plasmid Digested with BamHI KpnI； La DNA Marker；（C）：Ad-Mecom-EGFP 腺病毒载体转染基底膜（Ad-Mecom-EGFP：绿色）；

【参考文献】：
期刊论文
[1]胚胎小鼠耳蜗感觉上皮的形态发生[J]. 刘少锋,周梁,李华伟,沈云珍.  中国耳鼻咽喉头颈外科. 2005(07)

博士论文
[1]小鼠听觉上皮发育及其相关分子机制[D]. 刘少峰.复旦大学 2010



本文编号：3356329