人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶通过肿瘤坏死因子-α转化酶—表皮生长因子受体信号通路诱导慢性鼻—鼻窦炎高分泌的研究

发布时间：2017-04-30 10:15

  本文关键词：人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶通过肿瘤坏死因子-α转化酶—表皮生长因子受体信号通路诱导慢性鼻—鼻窦炎高分泌的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:利用人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激小鼠鼻腔黏膜,建立鼻腔高分泌模型,探索肿瘤坏死因子-α转化酶(TACE)-表皮生长因子受体(EGFR)信号通路在体内黏蛋白MUC5AC高分泌中的作用研究。方法:1.选取6周雌性C57BL/6小鼠随机分成对照组和HNE组。采用HNE滴鼻方法建立小鼠鼻腔高分泌模型,在最后一次滴鼻后取小鼠鼻腔固定,通过HE及PAS染色观察每组鼻黏膜的病理改变情况。2.模型建立成功后,以TACE抑制剂(TAPI-2)及EGFR抑制剂(AG1478)为干预因素,取鼻黏膜行HE及PAS染色观察每组鼻黏膜的病理变化,TACE、EGFR和MUC5AC在黏膜上皮层中的分布情况是利用免疫组化的方法检测,采用蛋白印迹(Western Blot)法检测小鼠鼻黏膜中p-EGFR、EGFR、TACE蛋白表达情况,各组鼻黏膜中MUC5AC蛋白的变化通过酶联免疫吸附试验(ELISA)来检测,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测TACE、EGFR和MUC5AC m RNA的表达情况。结果:1.成功建立了HNE诱导下小鼠鼻腔高分泌模型。HE染色结果显示,HNE组可见黏膜上皮排列不整齐,杯状细胞及黏膜下腺体增生,大量炎性细胞浸润;对照组则见黏膜上皮排列规则,可见少量杯状细胞,黏膜下腺体未见增生。HNE组鼻黏膜上皮层及黏膜下腺体PAS染色可见紫红色的强阳性染色颗粒,对照组见弱阳性表达。2.在TAPI-2及AG1478的干预下,与HNE组相比,HE染色见小鼠鼻黏膜杯状细胞及腺体增生不明显,上皮排列较整齐;PAS染色见黏膜下腺体中紫红色染色明显减少。免疫组化法检测小鼠鼻黏膜组织中MUC5AC表达在黏膜上皮层的杯状细胞及黏膜下腺体中,TACE和EGFR主要表达于黏膜上皮层中,结果显示MUC5AC、TACE和EGFR在HNE组中表达均明显高于对照组(P0.05);在HNE+TAPI-2组中以上各指标与HNE组相比均下调(P0.05);而HNE+AG1478组中TACE的表达与HNE组相近(P0.05),EGFR和MUC5AC的表达均明显下调(P0.05)。蛋白印迹法见HNE组中TACE、EGFR和P-EGFR蛋白的表达明显高于对照组(P0.01);HNE+TAPI-2组中以上三个指标的表达与HN E组相比均明显下调(P0.01);而在HNE+AG1478组中TACE蛋白的表达情况与HNE组相比无明显变化(P0.05),EGFR和P-EGFR蛋白的表达情况与HNE组相比均明显下调(P0.01)酶联免疫吸附试验结果表明HNE组MUC5AC蛋白表达量较对照组显著升高(P0.01),HNE+TAPI-2组和HNE+AG1478组的表达与HNE组相比明显下调(P0.01)。荧光定量PCR结果显示HNE组鼻黏膜组织中TACE、EGFR和MUC5AC m RNA的表达量与对照组相比均增加(P0.01);与HNE组相比,HNE+TAPI-2组中各指标m RNA的表达量均下调(P0.01);而HNE+AG1478组中TACE m RNA的表达量与HNE组比较无明显变化(P0.05),EGFR和MUC5AC m RNA的表达量较HNE组均减少(P0.01)。结论:1.HNE作为刺激物可诱导小鼠鼻黏膜呈现高分泌状态。2.在TAPI-2或AG1478的干预下,黏膜中MUC5AC表达明显下调,表明HNE-TACE-EGFR信号通路在鼻黏膜高分泌中具有重要的作用。
【关键词】：人嗜中性细胞弹性蛋白酶 肿瘤坏死因子-α转化酶 表皮生长因子受体 黏蛋白MUC5AC
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R765.41
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 鼻黏膜高分泌模型的建立12-17
• 2.1 实验材料与方法12-15
• 2.1.1 实验动物12
• 2.1.2 实验仪器12
• 2.1.3 实验试剂12-13
• 2.1.4 实验试剂配制13
• 2.1.5 实验方法13-15
• 2.2 实验结果15-17
• 2.2.1 HE染色结果15-16
• 2.2.2 PAS染色结果16-17
• 第3章 TACE、EGFR对MUC5AC表达的影响17-36
• 3.1 实验材料与方法17-26
• 3.1.1 实验动物17
• 3.1.2 实验仪器17-18
• 3.1.3 实验试剂18-19
• 3.1.4 实验试剂配制19-20
• 3.1.5 实验方法20-26
• 3.1.6 数据处理与统计分析26
• 3.2 结果26-36
• 3.2.1 HE染色及PAS染色结果26-28
• 3.2.2 免疫组织化学染色结果28-32
• 3.2.3 免疫印迹结果32-33
• 3.2.4 酶联免疫吸附试验结果33-34
• 3.2.5 荧光定量PCR结果34-36
• 第4章 讨论36-41
• 4.1 实验动物的选择37-38
• 4.2 鼻腔高分泌模型的建立及评判38-39
• 4.3 TAPI-2、AG1478的干预作用39-40
• 4.4 总结与展望40-41
• 第5章 结论41-42
• 致谢42-43
• 参考文献43-46
• 攻读学位期间的研究成果46-47
• 综述 黏蛋白与鼻腔炎症性疾病的研究进展47-53
• 参考文献51-53

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